| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 1、前言 | 第9-20页 |
| ·禽传染性支气管炎概述 | 第9-10页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒(IBV)的分子研究进展 | 第10-11页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒的生物学分类地位 | 第10页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒粒子结构 | 第10-11页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒基因结构 | 第11页 |
| ·IBV的结构蛋白与生物学功能 | 第11-13页 |
| ·S蛋白的结构与生物学功能 | 第12-13页 |
| ·M蛋白的结构与生物学功能 | 第13页 |
| ·酵母双杂交系统及在病毒学研究中的应用 | 第13-17页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第17-18页 |
| ·本研究前期工作基础 | 第18页 |
| ·本研究的目的意义 | 第18-19页 |
| ·本研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 2、实验材料和方法 | 第20-39页 |
| ·实验材料 | 第20-27页 |
| ·毒株、质粒载体 | 第20-25页 |
| ·菌株和细胞 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·主要试剂与常规溶液的配置 | 第25-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-39页 |
| ·RT-PCR扩增S1、M基因 | 第27-29页 |
| ·IBV S1、M基因PMD18-T载体构建及在大肠杆菌DH5A中扩增 | 第29-32页 |
| ·双杂交质粒载体PGPBKT7-S1与PGADT7-REC-M的构建 | 第32-33页 |
| ·酵母双杂交重组质粒PGPBKT7-S1与PGADT7-REC-M的鉴定 | 第33-34页 |
| ·AH109转化子的自激活和毒性检测 | 第34页 |
| ·重组质粒PGPBKT7-S1与PGADT7-REC-M转化酵母AH109 | 第34-35页 |
| ·在缺陷性培养基中筛选AH109阳性克隆 | 第35页 |
| ·B-半乳糖苷酶活性验证IBV S1蛋白与M蛋白相互作用 | 第35页 |
| ·验证IBV S1蛋白与M蛋白相互作用 | 第35页 |
| ·免疫共沉淀重组质粒PCMV-HA-S1、PCMV-MYC-M构建 | 第35-37页 |
| ·重组质粒PCMV-HA-S1、PCMV-MYC-M转染HEK293细胞 | 第37-38页 |
| ·免疫共沉淀反应 | 第38-39页 |
| ·生物信息学分析 | 第39页 |
| 3、结果 | 第39-49页 |
| ·RT-PCR扩增S1、M基因结果 | 第39-40页 |
| ·IBV S1、M基因PMD18-T克隆鉴定结果 | 第40页 |
| ·序列测定结果 | 第40-41页 |
| ·M基因测序结果 | 第40-41页 |
| ·S1基因测序结果 | 第41页 |
| ·酵母双杂交重组质粒PGPBKT7-S1与PGADT7-REC-M的鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·AH109转化子的自激活和毒性检测结果 | 第42页 |
| ·在缺陷性培养基中筛选AH109阳性克隆结果 | 第42-43页 |
| ·B-半乳糖苷酶活性验证IBV S1蛋白与M蛋白相互作用 | 第43页 |
| ·验证IBV S1蛋白与M蛋白相互作用 | 第43-44页 |
| ·重组质粒PCMV-HA-S1、PCMV-MYC-M鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·免疫共沉淀反应 | 第45-46页 |
| ·生物信息学分析 | 第46-49页 |
| ·利用DNASTAR分析蛋白质二级结构 | 第46-47页 |
| ·磷酸化位点分析 | 第47页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第47-49页 |
| 4、讨论 | 第49-52页 |
| ·IBV S1蛋白与M蛋白结合可能的生物学作用 | 第49-50页 |
| ·存在相互作用可能的原因 | 第50-51页 |
| ·解决的科学问题及意义 | 第51页 |
| ·进一步研究的建议 | 第51-52页 |
| 5、结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
