| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-25页 |
| 1 大麦黄矮病毒的分子生物学 | 第9-15页 |
| ·生物学特性 | 第9-10页 |
| ·分类学 | 第10-11页 |
| ·基因组结构 | 第11-12页 |
| ·主要基因的功能 | 第12-15页 |
| ·复制酶 | 第12-13页 |
| ·结构蛋白 | 第13-14页 |
| ·运动蛋白 | 第14-15页 |
| ·P6蛋白 | 第15页 |
| 2 植物抗病毒基因工程研究进展 | 第15-21页 |
| ·病毒自身基因介导的抗性 | 第15-17页 |
| ·CP基因的抗病毒策略 | 第15-16页 |
| ·病毒复制酶基因介导的抗病性 | 第16-17页 |
| ·病毒运动蛋白(MP)基因介导病毒抗性 | 第17页 |
| ·利用植物自身的抗病基因介导的策略 | 第17-18页 |
| ·利用植物源抗病毒活性物质基因 | 第18-19页 |
| ·直接或间接作用于病毒核酸的策略 | 第19-21页 |
| ·病毒反义RNA(Antisense RNA)介导的病毒抗性 | 第19-20页 |
| ·dsRNA分解酶基因 | 第20页 |
| ·RNA干扰介导的病毒抗性 | 第20-21页 |
| 3 RNA沉默 | 第21-22页 |
| ·RNA沉默的研究概况 | 第21页 |
| ·RNA沉默机制及其特征 | 第21-22页 |
| 4 目的与意义 | 第22-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-35页 |
| 1 试验材料 | 第25页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-35页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第25-27页 |
| ·大肠杆菌mach1-T1感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·农杆菌(AGL1)感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·感受态细胞的转化(电击法) | 第27页 |
| ·菌种的培养和保存 | 第27页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱裂解法) | 第27-28页 |
| ·DNA片断的回收 | 第28-29页 |
| ·酶切产物的纯化(酚氯仿法) | 第28-29页 |
| ·DNA的快速回收 | 第29页 |
| ·植物表达载体构建 | 第29-34页 |
| ·PCR引物 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第30-32页 |
| ·pMBW246-GAVpol+中间载体的构建 | 第32页 |
| ·发卡RNA中间表达载体pMBW246-hp-GAVpol的构建 | 第32-33页 |
| ·具双T-DNA区的GAV复制酶基因RNAi植物表达载体构建 | 第33-34页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-42页 |
| 1 编码BYDV-GAV复制酶基因发卡RNA的载体构建 | 第35-40页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第35-36页 |
| ·pMBW246-GAVpol+中间载体的构建 | 第36-37页 |
| ·发卡RNA中间表达载体pMBW246-hp-GAVpol的构建 | 第37-39页 |
| ·具双T-DNA区的GAV复制酶基因RNAi植物表达载体的构建及验证 | 第39-40页 |
| 2 RNAi载体转化农杆菌 | 第40-42页 |
| 第四章 讨论 | 第42-45页 |
| 1 我国主要的大麦黄矮病毒株系 | 第42页 |
| 2 抗大麦黄矮病基因工程方法 | 第42-43页 |
| 3 转基因作物的安全性问题及其对策 | 第43-44页 |
| 4 载体pV8-2B-hpGAVpol的特点及应用前景 | 第44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 参考文献: | 第45-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 附录1 大麦黄矮病毒GAV基因组全序列及其各基因编码的氨基酸序列 | 第52-55页 |
| 附录2 缩略词表 | 第55-57页 |
| 附录3 pV8-2B-hpGAVpol载体构建流程图 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第58页 |
