| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-16页 |
| 第1章 引言 | 第16-39页 |
| ·TGFβ超家族及其信号通路 | 第16-21页 |
| ·TGFβ信号通路概述 | 第16页 |
| ·TGFβ信号通路的分子生物学基础 | 第16-20页 |
| ·软体动物TGFβ信号通路研究进展 | 第20-21页 |
| ·TGFβ信号通路重要的生理功能 | 第21-27页 |
| ·TGFβ信号通路与生长发育 | 第21-22页 |
| ·TGFβ信号通路与创伤修复 | 第22-23页 |
| ·TGFβ信号通路与免疫反应 | 第23-24页 |
| ·TGFβ信号通路与生物矿化 | 第24-26页 |
| ·生物矿化与创伤修复、免疫反应的关系 | 第26-27页 |
| ·合浦珠母贝基质蛋白研究进展 | 第27-32页 |
| ·贝壳和珍珠形成机理 | 第27-29页 |
| ·合浦珠母贝基质蛋白的类型 | 第29-30页 |
| ·合浦珠母贝基质蛋白的区域化分布 | 第30-32页 |
| ·真核启动子研究概述 | 第32-35页 |
| ·真核启动子的特点 | 第32页 |
| ·植物启动子研究成果的启示 | 第32-33页 |
| ·启动子序列的克隆方法 | 第33-34页 |
| ·启动子生物信息学分析方法 | 第34-35页 |
| ·启动子功能研究的方法 | 第35页 |
| ·软体动物启动子研究进展 | 第35页 |
| ·研究目的与意义 | 第35-37页 |
| ·论文各部分主要研究内容 | 第37-39页 |
| 第2章 合浦珠母贝ALR1 基因克隆及其功能研究 | 第39-67页 |
| ·前言 | 第39-40页 |
| ·材料与方法 | 第40-55页 |
| ·实验材料和仪器 | 第40-41页 |
| ·总RNA 的提取 | 第41-43页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第43页 |
| ·Pf-ALR1 基因保守片段的扩增 | 第43-48页 |
| ·Pf-ALR1 基因cDNA 末端快速扩增 | 第48-52页 |
| ·Pf-ALR1 基因cDNA 全长序列的扩增 | 第52页 |
| ·Pf-ALR1 基因cDNA 全长序列的分析 | 第52-53页 |
| ·半定量RT-PCR | 第53-55页 |
| ·结果 | 第55-64页 |
| ·Pf-ALR1 基因的克隆 | 第55页 |
| ·合浦珠母贝Pf-ALR1 基因cDNA 序列特征 | 第55-56页 |
| ·合浦珠母贝Pf-ALR1 蛋白序列特征 | 第56-57页 |
| ·合浦珠母贝Pf-ALR1 蛋白L45 loop 序列特征 | 第57-58页 |
| ·Pf-ALR1 蛋白序列同源性比较及进化关系分析 | 第58-62页 |
| ·Pf-ALR1 基因在贝各组织及发育阶段中的表达 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| ·Pf-ALR1 基因的克隆 | 第64页 |
| ·Pf-ALR1 蛋白序列分析及其分类 | 第64-65页 |
| ·Pf-ALR1 基因功能的初步分析 | 第65-67页 |
| 第3章 合浦珠母贝Smad3 基因克隆及其功能研究 | 第67-97页 |
| ·前言 | 第67-69页 |
| ·材料与方法 | 第69-83页 |
| ·实验材料和仪器 | 第69页 |
| ·Pf-Smad3 基因保守片段的扩增 | 第69-70页 |
| ·Pf-Smad3 基因cDNA 末端快速扩增 | 第70-73页 |
| ·Pf-Smad3 基因cDNA 全长序列的扩增及分析 | 第73-74页 |
| ·半定量RT-PCR | 第74-75页 |
| ·原位杂交 | 第75-77页 |
| ·贝壳缺刻实验 | 第77-78页 |
| ·原代培养外套膜组织细胞 | 第78-80页 |
| ·药物刺激实验 | 第80页 |
| ·RNA 干扰 | 第80-81页 |
| ·实时相对定量PCR | 第81-82页 |
| ·扫描电镜观察新生贝壳形貌 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-93页 |
| ·Pf-Smad3 基因的克隆 | 第83-84页 |
| ·合浦珠母贝Pf-Smad3 基因的cDNA 序列特征 | 第84-85页 |
| ·合浦珠母贝Pf-Smad3 蛋白序列特征 | 第85页 |
| ·Pf-Smad3 蛋白序列同源性比较及进化关系分析 | 第85-87页 |
| ·Pf-Smad3 基因在贝各组织和不同发育阶段中的表达 | 第87-89页 |
| ·Pf-Smad3 和Pf-ALR1 基因在外套膜组织中的表达分布 | 第89-90页 |
| ·Pf-Smad3 和Pf-ALR1 基因在贝壳缺刻修复过程中表达的变化 | 第90-91页 |
| ·Pf-Smad3 和Pf-ALR1 基因在珍珠囊形成过程中表达的变化 | 第91页 |
| ·Pf-Smad3 与合浦珠母贝基质蛋白基因表达水平的相关性 | 第91-92页 |
| ·抑制Pf-Smad3 基因表达对贝KRMP 基因表达水平的影响 | 第92-93页 |
| ·药物刺激对新生贝壳棱柱层表面超微结构的影响 | 第93页 |
| ·讨论 | 第93-97页 |
| ·Pf-Smad3 蛋白序列的高度保守性 | 第93-94页 |
| ·Pf-ALR1 和Pf-Smad3 基因表达的相关性 | 第94-95页 |
| ·Pf-Smad3 基因功能的初步分析 | 第95-96页 |
| ·Pf-Smad3 与基质蛋白基因表达的关系 | 第96-97页 |
| 第4章 合浦珠母贝基质蛋白启动子克隆及活性研究 | 第97-115页 |
| ·前言 | 第97-99页 |
| ·材料与方法 | 第99-105页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第99页 |
| ·合浦珠母贝基因组DNA 的提取 | 第99页 |
| ·KRMP 启动子克隆及测序 | 第99-100页 |
| ·KRMP 启动子序列的生物信息学分析 | 第100-101页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第101-103页 |
| ·细胞培养 | 第103-104页 |
| ·瞬时转染 | 第104页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第104-105页 |
| ·半定量RT-PCR | 第105页 |
| ·结果 | 第105-112页 |
| ·贝基质蛋白KRMP 启动子的克隆 | 第105-106页 |
| ·KRMP 启动子与贝其它启动子的序列相似度 | 第106-108页 |
| ·KRMP 启动子序列特征 | 第108-110页 |
| ·KRMP 启动子的活性 | 第110页 |
| ·过表达Pf-Smad3 对KRMP 启动子活性的影响 | 第110-111页 |
| ·过表达Pf-Smad3 对鼠细胞Sox9 基因表达的影响 | 第111-112页 |
| ·讨论 | 第112-115页 |
| ·合浦珠母贝启动子序列的克隆方法 | 第112页 |
| ·合浦珠母贝启动子功能的初步分析 | 第112-113页 |
| ·基质蛋白KRMP、Pearlin 和Prisilkin-39 之间的异同点 | 第113-114页 |
| ·贝Sox 同源蛋白功能的预测分析 | 第114页 |
| ·TGFβ信号通路对贝基质蛋白调控机制的初步分析 | 第114-115页 |
| 第5章 合浦珠母贝Smad3 与engrailed 关系的研究 | 第115-131页 |
| ·前言 | 第115-116页 |
| ·材料与方法 | 第116-123页 |
| ·主要实验材料和仪器 | 第116-117页 |
| ·PCR 扩增合浦珠母贝Pf-engrailed 基因的片段 | 第117页 |
| ·半定量RT-PCR | 第117-118页 |
| ·实时相对定量PCR | 第118-119页 |
| ·融合蛋白表达载体的构建 | 第119-120页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及分离纯化 | 第120-121页 |
| ·BCA 法测定蛋白质含量 | 第121页 |
| ·贝外套膜组织总核蛋白的提取 | 第121页 |
| ·GST pull-down 实验 | 第121-123页 |
| ·结果 | 第123-129页 |
| ·合浦珠母贝Pf-engrailed 基因片段的序列特征 | 第123-124页 |
| ·合浦珠母贝Pf-engrailed 蛋白EH4 片段高度保守 | 第124-125页 |
| ·Pf-engrailed 基因在不同胚胎发育过程中的表达 | 第125页 |
| ·Pf-engrailed 基因在贝壳缺刻修复过程中表达的变化 | 第125-126页 |
| ·Pf-Smad3 和Pf-engrailed、Pf-BMP2 基因表达的相关性 | 第126-127页 |
| ·药物刺激对Pf-Rel 和Pf-IKK 基因表达的影响 | 第127页 |
| ·Pf-Smad3 蛋白MH1、MH2 结构域的重组表达 | 第127-129页 |
| ·讨论 | 第129-131页 |
| ·贝engrailed 基因功能初步分析 | 第129-130页 |
| ·TGFβ与NF-κB 等其他信号通路的关系 | 第130页 |
| ·贝中可能与Smad3 作用的蛋白 | 第130-131页 |
| 第6章 结论 | 第131-132页 |
| 第7章 附件：重组PRH 蛋白与3 种启动子结合特性的研究 | 第132-162页 |
| ·前言 | 第132-134页 |
| ·材料与方法 | 第134-146页 |
| ·实验材料 | 第134-135页 |
| ·实验仪器 | 第135页 |
| ·化学交联 | 第135-136页 |
| ·胰蛋白酶酶切 | 第136-137页 |
| ·质谱分析 | 第137页 |
| ·表面等离子共振成像实验 | 第137-139页 |
| ·足迹法 | 第139-144页 |
| ·紫外激光足迹图谱法 | 第144-146页 |
| ·结果和讨论 | 第146-162页 |
| ·重组PRH 蛋白化学交联结果 | 第146-148页 |
| ·质谱测定重组PRH 蛋白分子量 | 第148页 |
| ·胰蛋白酶切后质谱结果 | 第148-152页 |
| ·PRH 与3 种人启动子序列的结合特性 | 第152-159页 |
| ·PRH 在3 种启动子上的DNA 结合区域的确定 | 第159-162页 |
| 参考文献 | 第162-180页 |
| 致谢 | 第180-181页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第181-182页 |
