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球毛壳菌丝氨酸蛋白酶基因克隆及原核表达研究

Abstract第1-6页
摘要第6-10页
Chapter 1 Introduction第10-26页
   ·Significance of the research第10-11页
   ·Literature review第11-18页
     ·Research progress on biological control of plant diseases第11-12页
     ·The damage of fungal plant pathogens on food production第12页
     ·The definition of plant disease biological control第12-15页
     ·Taxonomic characteristics of Chaetomium第15页
     ·Biological mechanism of Chaetomium species第15-16页
     ·The biocontrol properties of C globosum第16-17页
     ·C globosum genome dynamics第17-18页
   ·Research progress on Serine Proteases第18-25页
     ·Categorization of proteases第18页
     ·Microbial proteases第18-19页
     ·Serine proteases第19-23页
     ·E coli application to research第23-25页
   ·Funding and objectives of the research第25-26页
     ·Funding of this research第25页
     ·Main objectives of the research第25-26页
Chapter 2 Materials and methods第26-42页
   ·Materials第26-31页
     ·Microbial strains and plasmids第26-27页
     ·Culture media第27页
     ·Reagents and restriction enzymes used第27-28页
     ·Software used第28页
     ·Primers第28-29页
     ·Preparation of buffers and typical reagents第29-31页
     ·Instruments used第31页
   ·Experimental Techniques第31-42页
     ·ser gene sequencing第31-32页
     ·Cultivation of C globosum mycelia第32页
     ·ser gene cloning第32-35页
     ·Preparing CaC12 Competent E coli Cells第35页
     ·Plasmid Extraction第35页
     ·Bioinformatical analysis第35-36页
     ·Cloning of the protease gene第36页
     ·Expression pattern analysis of the protease gene第36-38页
     ·Induced expression at different incubation periods第38-39页
     ·Induced expression at different IPTG concentrations第39页
     ·SDS-PAGE analysis第39页
     ·Protease activity analysis of transformants第39-41页
     ·Optimum pH of the enzyme第41页
     ·Optimum temperature of the enzyme第41-42页
Chapter 3 Gene cloning and sequence analysis第42-55页
   ·Isolation of DNA and RNA第42-46页
     ·Isolation of high-quality DNA from C globosum第42页
     ·Isolation of high-quality RNA from C globosum第42页
     ·Synthesis of the cDNA template第42-44页
     ·C globosum ser gene sequence analysis第44-46页
   ·Bioinformatical Analysis of the ser gene sequence第46-53页
     ·Conserved Sequences in Translated Protein Sequence第47页
     ·SignalP Analysis第47-48页
     ·Amino Acid composition第48页
     ·Modeling of the ser gene第48-49页
     ·Multiple sequence alignment第49-51页
     ·Phylogenetic analysis of the subtilisin superfamily第51-53页
     ·Taxonomic classification of fungal strains第53页
   ·Chapter summary第53-55页
Chapter 4 Gene cloning and expression analysis第55-63页
   ·Transformation of E coli第55-61页
     ·pET-52b(+) vector extraction第55页
     ·Restriction Digestion of the ser gene and pET-52b(+) vector第55-56页
     ·Transformation of E coli Top 10第56页
     ·Transformation into E coli BL21 for Expression第56-57页
     ·Recombinant Vector Restriction Digest第57页
     ·SDS-PAGE Analysis第57-59页
     ·Characterization of the recombinant protease第59-61页
   ·Discussion第61-63页
Conclusion第63-64页
References第64-72页
Acknowledgements第72页

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