| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第18-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-31页 |
| 1.1 癌症的现状 | 第21-22页 |
| 1.2 遗传因素以及环境差异与癌症的关系 | 第22-25页 |
| 1.3 癌症的预防和化学治疗 | 第25-30页 |
| 1.4 展望 | 第30-31页 |
| 第二章 东亚人群rs4245739 位点与环境因素关系的研究 | 第31-47页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 实验试剂与设备 | 第32-34页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.2 实验仪器设备 | 第33页 |
| 2.2.3 试剂配制 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-41页 |
| 2.3.1 人血液基因组DNA的提取 | 第35页 |
| 2.3.2 SNaPshot法对rs4245739 进行分型 | 第35-39页 |
| 2.3.2.1 引物设计 | 第36页 |
| 2.3.2.2 PCR扩增含有rs424539 的片段 | 第36-37页 |
| 2.3.2.3 PCR产物的纯化 | 第37页 |
| 2.3.2.4 单碱基引物延伸反应(SNaPshot反应) | 第37-38页 |
| 2.3.2.5 SNaPshot产物的纯化 | 第38页 |
| 2.3.2.6 测序结果的检测与判读 | 第38-39页 |
| 2.3.3 测序验证rs4245739 分型结果 | 第39-40页 |
| 2.3.3.1 PCR扩增含有rs424539 的片段 | 第39页 |
| 2.3.3.2 PCR产物的纯化 | 第39页 |
| 2.3.3.3 测序PCR反应 | 第39-40页 |
| 2.3.3.4 测序反应产物纯化 | 第40页 |
| 2.3.4 环境因素数据的搜集 | 第40页 |
| 2.3.5 数据的处理 | 第40-41页 |
| 2.3.5.1 rs4245739 基因频率的计算 | 第40页 |
| 2.3.5.2 采样点样本Hardy-Weinberg平衡检验 | 第40-41页 |
| 2.3.5.3 rs4245739A频率与自然因素相关性分析 | 第41页 |
| 2.4 实验结果 | 第41-45页 |
| 2.4.1 采样点分布与民族种类 | 第41-43页 |
| 2.4.2 rs4245739A频率、自然因素及Hardy-Weiberg平衡结果 | 第43页 |
| 2.4.3 rs4245739A频率与环境因素相关性分析结果 | 第43-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 化合物3u在黑色素瘤细胞A375 中激活TRAIL通路抗癌机制的研究 | 第47-89页 |
| 3.1 引言 | 第47-48页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第48-56页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第48-52页 |
| 3.2.1.1 所用细胞系 | 第48-49页 |
| 3.2.1.2 主要实验试剂 | 第49-52页 |
| 3.2.2 主要实验仪器及设备 | 第52-53页 |
| 3.2.3 试剂配制 | 第53-56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-68页 |
| 3.3.1 化合物库3 的来源 | 第56-57页 |
| 3.3.2 细胞培养 | 第57-58页 |
| 3.3.2.1 细胞复苏 | 第57页 |
| 3.3.2.2 细胞传代 | 第57页 |
| 3.3.2.3 细胞冻存 | 第57-58页 |
| 3.3.2.4 Pulp细胞的原代培养 | 第58页 |
| 3.3.3 MTT实验 | 第58-60页 |
| 3.3.4 化合物3u抗癌作用生效时间的检测 | 第60页 |
| 3.3.5 克隆形成实验 | 第60-61页 |
| 3.3.6 蛋白样品的制备 | 第61-63页 |
| 3.3.6.1 细胞总蛋白的提取 | 第61页 |
| 3.3.6.2 细胞线粒体蛋白的提取 | 第61-62页 |
| 3.3.6.3 细胞膜蛋白的提取 | 第62-63页 |
| 3.3.6.4 BCA法测定蛋白浓度 | 第63页 |
| 3.3.7 蛋白质免疫印迹western blot | 第63-65页 |
| 3.3.7.1 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第64页 |
| 3.3.7.2 转膜 | 第64页 |
| 3.3.7.3 免疫学检测 | 第64-65页 |
| 3.3.8 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第65-68页 |
| 3.3.8.1 细胞总RNA的提取 | 第65-66页 |
| 3.3.8.2 cDNA第一链合成 | 第66-67页 |
| 3.3.8.3 实时荧光定量PCR | 第67-68页 |
| 3.3.8.4 数据处理 | 第68页 |
| 3.4 实验结果 | 第68-87页 |
| 3.4.1 化合物库3 的化学结构与物理性质 | 第68-72页 |
| 3.4.2 化合物库3 抗癌活性初筛结果 | 第72-73页 |
| 3.4.3 三种候选化合物的复筛结果 | 第73-76页 |
| 3.4.4 3u处理A375 克隆形成的结果 | 第76页 |
| 3.4.5 3u诱导细胞死亡时间和浓度的探索 | 第76-77页 |
| 3.4.6 3u抗癌作用与内源性凋亡途径的关系 | 第77-80页 |
| 3.4.7 较高浓度3u可能的抗癌机制 | 第80页 |
| 3.4.8 外源性凋亡信号的来源 | 第80-82页 |
| 3.4.9 3u上调TNFRSF和 FADD表达的机制 | 第82-83页 |
| 3.4.10 较低浓度3u可能的抗癌机制 | 第83-85页 |
| 3.4.11 使用抑制剂再验证3u的抗癌机制 | 第85-87页 |
| 3.5 讨论 | 第87-89页 |
| 第四章 三药联用提高癌细胞对TRAIL敏感性的研究 | 第89-106页 |
| 4.1 引言 | 第89-90页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第90-91页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第90-91页 |
| 4.2.1.1 所用的质粒 | 第90页 |
| 4.2.1.2 主要实验试剂 | 第90-91页 |
| 4.3 实验方法 | 第91-93页 |
| 4.3.1 敲低c-FLIP质粒的制备及转染 | 第91-93页 |
| 4.3.2 caspase-3 活性测定 | 第93页 |
| 4.4 实验结果 | 第93-104页 |
| 4.4.1 抑制剂作用条件的优化 | 第93-96页 |
| 4.4.2 三药联用诱导U2OS细胞凋亡的分子机制 | 第96-98页 |
| 4.4.3 三药联用对多种癌细胞系的抗癌效果 | 第98-100页 |
| 4.4.4 三药联用在正常细胞中的效果 | 第100-102页 |
| 4.4.5 三药联用不敏感的癌细胞逃逸凋亡 | 第102-103页 |
| 4.4.6 癌细胞凋亡敏感性的恢复 | 第103-104页 |
| 4.5 讨论 | 第104-106页 |
| 第五章 结论与展望 | 第106-109页 |
| 5.1 结论 | 第106-107页 |
| 5.2 创新点 | 第107页 |
| 5.3 展望 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-123页 |
| 附表 | 第123-126页 |
| 附录 | 第126-127页 |
