| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-15页 |
| 缩略语表 | 第15-19页 |
| 第1章 文献综述 | 第19-36页 |
| ·天然免疫简介 | 第19页 |
| ·RLRs介导的抗病毒天然免疫 | 第19-26页 |
| ·RLRs的分子结构 | 第20页 |
| ·RLRs识别病毒RNA | 第20-22页 |
| ·IPS-1是RLRs信号通路的重要衔接蛋白 | 第22-23页 |
| ·病毒诱导的Ⅰ/Ⅲ型干扰素转录激活机制 | 第23-24页 |
| ·Ⅰ/Ⅲ型干扰素介导抗病毒作用 | 第24-25页 |
| ·病毒诱导的RANTES转录激活机制 | 第25-26页 |
| ·RLRs信号通路的调节机制 | 第26-29页 |
| ·泛素化调节RLRs信号通路 | 第26-27页 |
| ·去泛素化调节RLRs信号通路 | 第27-28页 |
| ·RLRs信号通路的其他调节机制 | 第28-29页 |
| ·病毒逃避RLRs信号通路的策略 | 第29-30页 |
| ·口蹄疫简介 | 第30-31页 |
| ·口蹄疫病毒分子生物学特征 | 第31-32页 |
| ·FMDV逃逸宿主天然免疫应答的机制 | 第32-36页 |
| ·FMDV能引起宿主淋巴细胞的减少 | 第32页 |
| ·FMDV抑制树突状细胞产生干扰素 | 第32-33页 |
| ·FMDV破坏NK细胞功能 | 第33-34页 |
| ·FMDV蛋白酶参与宿主的免疫抑制 | 第34-36页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第36-37页 |
| 第3章 材料与方法 | 第37-50页 |
| ·试验材料 | 第37-40页 |
| ·毒株与菌株 | 第37页 |
| ·细胞以及转染相关材料 | 第37页 |
| ·载体构建所需材料及获赠载体 | 第37-40页 |
| ·Western Bolt以及免疫共沉淀实验所需材料 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-50页 |
| ·载体构建 | 第40-46页 |
| ·猪天然免疫效应分子启动子荧光素酶报告载体的构建 | 第40-42页 |
| ·猪天然免疫通路相关信号分子表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·IPS-1 RNAi载体构建 | 第44-45页 |
| ·FMDV L~(pro)表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·半定量RT-PCR检测不同组织中IPS-1的mRNA含量 | 第46页 |
| ·双荧光素酶报告实验 | 第46-47页 |
| ·实时定量RT-PCR检测基因mRNA水平 | 第47页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第47页 |
| ·Western Blot样品制备 | 第47-48页 |
| ·免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CO-IP)技术检测蛋白泛素化修饰 | 第48页 |
| ·体外去泛素化实验 | 第48页 |
| ·猪IFN-λ1抗FMDV增殖 | 第48-49页 |
| ·统计学方法 | 第49-50页 |
| 第4章 结果与分析 | 第50-103页 |
| ·猪天然免疫效应分子启动子荧光素酶报告系统的建立 | 第50-62页 |
| ·猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点荧光素酶报告系统的建立 | 第50-53页 |
| ·猪IFN-β启动子及其4个重复的NF-κB结合位点序列的荧光素酶载体的构建 | 第50-51页 |
| ·Poly(dA:dT)/poly(I:C)在PK-15细胞中诱导猪IFN-β的表达 | 第51-53页 |
| ·猪RANTES启动子荧光素酶报告系统的建立 | 第53-62页 |
| ·猪RANTES基因5’端启动子序列分析 | 第53页 |
| ·猪RANTES启动子在PK-15细胞中的转录激活分析 | 第53-55页 |
| ·Poly(dA:dT)/poly(I:C)在PK-15细胞中诱导猪RANTES的表达 | 第55-57页 |
| ·猪RANTES启动子的不同区域对poly(dA:dT)/poly(I:C)诱导的RANTES启动子活性的影响 | 第57-59页 |
| ·IRF-3/7在poly(dA:dT)/poly(I:C)诱导猪RANTES表达中的作用 | 第59-62页 |
| ·猪天然免疫信号通路相关分子的克隆 | 第62-71页 |
| ·猪β-干扰素启动子刺激物1(IPS-1)的克隆以及功能鉴定 | 第62-70页 |
| ·猪IPS-1克隆和序列分析 | 第62-64页 |
| ·猪IPS-1 mRNA组织表达差异分析 | 第64-65页 |
| ·猪IPS-1的亚细胞定位 | 第65-66页 |
| ·猪IPS-1通过激活NF-κB和IRF-3/7诱导Ⅰ型干扰素的产生 | 第66-68页 |
| ·猪IPS-1参与poly(I:C)诱导的Ⅰ型干扰素 | 第68-70页 |
| ·猪天然免疫信号通路其他相关分子的克隆 | 第70-71页 |
| ·口蹄疫病毒L~(pro)和3C~(pro)调控宿主天然免疫反应及其分子机制 | 第71-103页 |
| ·FMDV L~(pro)通过下调IRF-3/7的表达抑制poly(I:C)诱导的Ⅰ型干扰素转录 | 第71-79页 |
| ·FMDV L~(pro)抑制poly(I:C)诱导的IFN-a1/β转录 | 第71-72页 |
| ·FMDV L~(pro)通过阻碍IRF-3/7和NF-KB的活化抑制IFN-α1/β启动子的激活 | 第72-73页 |
| ·FMDV L~(pro)显著抑制多种IRFs依赖的细胞因子转录 | 第73-74页 |
| ·FMDV L~(pro)抑制IRF-3/7介导的IFN-α1/β启动子激活 | 第74-75页 |
| ·FMDV L~(pro)下调IRF-3/7蛋白的表达 | 第75-77页 |
| ·FMDV L~(pro)的蛋白酶活性以及SAP结构域参与其下调IRF-3/7蛋白的表达 | 第77-79页 |
| ·FMDV L~(pro)作为病毒编码的去泛素化蛋白酶负调控Ⅰ型干扰素的产生 | 第79-89页 |
| ·生物信息学分析显示FMDV L~(pro)可能是病毒编码的去泛素化蛋白酶 | 第79-80页 |
| ·FMDV Lb~(pro)在体外能切割K48和K63连接的多聚泛素链 | 第80-81页 |
| ·FMDV Lb~(pro)在体内去泛素化活性检测 | 第81-83页 |
| ·FMDV Lb~(pro)的去泛素化活性不依赖其切割eIF-4G的活性 | 第83-85页 |
| ·FMDV Lb~(pro)的去泛素化活性参与其抑制Ⅰ型干扰素的产生 | 第85-87页 |
| ·FMDV Lb~(pro)抑制RIG-I、TBK1、TRAF3、TRAF6的去泛素化 | 第87-89页 |
| ·FMDV L~(pro)通过抑制IFN-λ1转录负调控IFN-k1的抗病毒作用 | 第89-95页 |
| ·猪IFN-λ1抑制FMDV的增殖 | 第89页 |
| ·猪IFN-λ1能显著诱导多种抗病毒蛋白的表达 | 第89-90页 |
| ·FMDV感染不能诱导IFN-M的表达 | 第90-91页 |
| ·FMDV L~(pro)参与抑制IFN-λ1启动子的激活 | 第91-93页 |
| ·FMDV Lb~(pro)抑制RLRs介导的IFN-λ1启动子激活 | 第93页 |
| ·FMDV L~(pro)的蛋白酶活性以及SAP结构域参与其抑制IFN-λ1启动子的激活 | 第93-95页 |
| ·FMDV L~(prp)抑制poly(I:C)诱导的RANTES转录的分子机制研究 | 第95-99页 |
| ·FMDV L~(pro)抑制poly(I:C)诱导的RANTES的转录 | 第95页 |
| ·FMDV L~(pro)通过IRSE抑制poly(I:C)诱导的RANTES启动子活性 | 第95-97页 |
| ·FMDV L~(pro)抑制IRF-3/7介导的RANTES启动子激活 | 第97-98页 |
| ·FMDV L~(pro)的蛋白酶活性以及SAP结构域参与其抑制由poly(I:C)诱导的RANTES表达 | 第98-99页 |
| ·FMDV 3C~(pro)蛋白酶抑制I型干扰素产生的分子机制初步研究 | 第99-103页 |
| ·FMDV 3C~(pro)抑制poly(I:C)诱导的IFN-α1/β转录 | 第99-100页 |
| ·FMDV 3C~(pro)通过阻碍IRF-3/7的活化抑制IFN-α1/β启动子的激活 | 第100页 |
| ·FMDV 3C~(pro)显著抑制多种IRFs依赖的细胞因子转录 | 第100-101页 |
| ·FMDV 3C~(pro)抑制RLRs介导的IFN-α1/β启动子激活 | 第101-103页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第103-115页 |
| ·讨论 | 第103-113页 |
| ·猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点荧光素酶报告系统的建立 | 第103-104页 |
| ·猪RANTES启动子荧光素酶报告系统的建立 | 第104-105页 |
| ·猪天然免疫信号通路相关分子的克隆 | 第105-106页 |
| ·FMDV L~(pro)通过下调IRF-3/7的表达抑制poly(I:C)诱导的Ⅰ型干扰素转录 | 第106-107页 |
| ·FMDV L~(pro)作为病毒编码的去泛素化蛋白酶负调控Ⅰ型干扰素的产生 | 第107-110页 |
| ·FMDV L~(pro)通过抑制IFN-M转录负调控IFN-M的抗病毒作用 | 第110-111页 |
| ·FMDV L~(pro)抑制poly(I:C)诱导的RANTES转录的分子机制研究 | 第111-112页 |
| ·FMDV 3C~(pro)蛋白酶抑制Ⅰ型干扰素产生的分子机制初步研究 | 第112-113页 |
| ·结论 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 附录 | 第136-138页 |
