| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第1章 引言 | 第9-21页 |
| ·膜蛋白和蛋白质的细胞膜定位 | 第9-10页 |
| ·枯草芽孢杆菌蛋白MrpF | 第10页 |
| ·大肠杆菌碱性磷酸酶PhoA | 第10-12页 |
| ·PhoA的结构 | 第10-11页 |
| ·PhoA的生理功能及应用 | 第11-12页 |
| ·跨膜蛋白转运机制 | 第12-14页 |
| ·膜蛋白的转运和插入机制 | 第12-13页 |
| ·跨膜螺旋 | 第13-14页 |
| ·膜定位与展示技术 | 第14-17页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| ·课题研究内容和方案 | 第19-21页 |
| 第2章 材料和方法 | 第21-30页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·实验菌株 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·实验中用到的PCR引物 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·PCR | 第24-25页 |
| ·质粒提取 | 第25-26页 |
| ·氯化钙法制备感受态细胞 | 第26页 |
| ·pYC[phoA-mrpF]融合载体的构建 | 第26-27页 |
| ·pYC[phoA-tags]融合载体的构建 | 第27页 |
| ·利用软件对MrpF进行细胞定位、疏水性及拓扑结构分析 | 第27页 |
| ·pYC[phoA-mrpF]融合载体的修饰改造 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| ·细胞膜的提取 | 第28页 |
| ·细胞PhoA酶活检测 | 第28-29页 |
| ·细胞膜PhoA酶活检测 | 第29-30页 |
| 第3章 枯草芽孢杆菌蛋白MrpF生物信息学分析 | 第30-34页 |
| ·mrpF基因序列 | 第30页 |
| ·MrpF蛋白的细胞定位、疏水性及拓扑结构预测分析 | 第30-33页 |
| ·MrpF的细胞定位分析 | 第30-31页 |
| ·MrpF疏水性分析 | 第31-32页 |
| ·MrpF拓扑结构分析 | 第32-33页 |
| ·疏水标签的疏水性分析 | 第33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第4章 疏水标签的设计和表达载体构建 | 第34-39页 |
| ·疏水标签的设计 | 第34-35页 |
| ·表达载体构建 | 第35-38页 |
| ·pYC[phoA-mrpF]融合载体的构建 | 第35-36页 |
| ·pYC[phoA-tags]融合载体的构建 | 第36-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第5章 融合蛋白的表达与活性检测 | 第39-44页 |
| ·融合蛋白PhoA-MrpF的表达 | 第39-40页 |
| ·融合疏水标签的PhoA表达 | 第40-43页 |
| ·细菌生长状况 | 第40-41页 |
| ·细胞PhoA酶活性 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第6章 融合蛋白的膜锚定 | 第44-50页 |
| ·细胞渗透压处理后PhoA检测 | 第44-46页 |
| ·酶活检测 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第45-46页 |
| ·细菌溶菌酶处理后PhoA检测 | 第46-48页 |
| ·酶活检测 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第47-48页 |
| ·细胞膜提取物PhoA检测 | 第48-49页 |
| ·细胞膜酶活检测 | 第48页 |
| ·细胞膜SDS-PAGE电泳 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第7章 结果与讨论 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 攻读学位期间获得与学位论文相关的科研成果目录 | 第57页 |