| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略语表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-38页 |
| 1 肥胖和炎症 | 第16-19页 |
| ·概述 | 第16页 |
| ·脂肪细胞与巨噬细胞 | 第16-18页 |
| ·炎症相关因子 | 第18-19页 |
| ·肿瘤坏死因子(TNFα)和白介素6(IL-6) | 第18-19页 |
| ·NF-κB信号通路 | 第19页 |
| 2 Resistin | 第19-28页 |
| ·resistin的结构与功能 | 第19-28页 |
| ·resistin的发现 | 第19-20页 |
| ·resistin基因和蛋白的结构特点 | 第20-22页 |
| ·resistin样家族分子 | 第22-23页 |
| ·resistin的组织分布 | 第23-24页 |
| ·resistin与肥胖相关的胰岛素抵抗 | 第24-26页 |
| ·resistin在葡萄糖代谢中的作用 | 第26-27页 |
| ·resistin与炎症 | 第27-28页 |
| 3 COX | 第28-32页 |
| ·概述 | 第28-30页 |
| ·调节COX-2的细胞信号网络 | 第30-32页 |
| ·脂多糖信号途径 | 第30页 |
| ·NO信号途径 | 第30-31页 |
| ·细胞因子信号途径 | 第31页 |
| ·生长因子信号途径 | 第31-32页 |
| 4 CHEMERIN和抗炎十五肽CHEMERIN-15 | 第32-38页 |
| ·Chemerin的发现及其结构特点 | 第32-33页 |
| ·Chemerin的免疫调节作用 | 第33-35页 |
| ·ChemR23、GPR1、CCRL2的发现以及结构特征 | 第35-36页 |
| ·Chemerin与抗炎作用 | 第36-38页 |
| ·ChemR23的脂质配体Resolvin E1的抗炎活性作用 | 第36-37页 |
| ·ChemR23的多肽配体Chemerin-15的抗炎活性作用 | 第37-38页 |
| 第二章 猪RESISTIN基因多克隆抗体的制备 | 第38-49页 |
| 1 前言 | 第38页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第38-40页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·质粒和菌株 | 第38页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第38-40页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要溶液配制 | 第39-40页 |
| 3 实验方法 | 第40-45页 |
| ·组织样品总RNA提取 | 第40-41页 |
| ·总RNA纯化 | 第41-42页 |
| ·总RNA纯度鉴定 | 第42页 |
| ·目标片段的扩增与纯化 | 第42-43页 |
| ·resistin扩增引物 | 第42页 |
| ·cDNA ORF的扩增纯化和测序 | 第42-43页 |
| ·pGEX-KG-R载体的构建鉴定与诱导表达 | 第43-44页 |
| ·包涵体的提取和目的蛋白纯化及浓度测定 | 第44页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第44页 |
| ·ELISA法测定效价 | 第44-45页 |
| ·抗体的保存 | 第45页 |
| 4 结果与分析 | 第45-49页 |
| ·猪resistin基因CDS片段的克隆 | 第45-46页 |
| ·pGEX-KG-R载体的构建与鉴定 | 第46-47页 |
| ·GST-resistin融合蛋白质的诱导表达与鉴定 | 第47页 |
| ·GST-resistin的纯化和定量 | 第47页 |
| ·多克隆抗体的制备和效价检测 | 第47-49页 |
| 第三章 巨噬细胞中RESISTIN对COX-2的调控 | 第49-61页 |
| 1 前言 | 第49页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第49-51页 |
| ·实验细胞 | 第49-50页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第50-51页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·溶液配制 | 第50-51页 |
| 3 实验方法 | 第51-54页 |
| ·细胞培养 | 第51页 |
| ·转录因子真核表达载体的构建 | 第51页 |
| ·质粒的大量提取 | 第51-52页 |
| ·质粒浓度和纯度检测 | 第52页 |
| ·细胞转染 | 第52页 |
| ·抗resistin抗血清的热灭活 | 第52-53页 |
| ·细胞RNA提取和纯化 | 第53页 |
| ·Real-time PCR | 第53-54页 |
| ·检测引物的设计 | 第53页 |
| ·Real-time PCR扩增条件 | 第53-54页 |
| ·Western blotting | 第54页 |
| ·数据统计分析 | 第54页 |
| 4 结果与分析 | 第54-59页 |
| ·resistin的表达情况的检测 | 第54-55页 |
| ·超表达的resistin对COX-2表达的调控 | 第55-58页 |
| ·猪resistin对COX-2的mRNA水平的调控 | 第55-56页 |
| ·巨噬细胞中小鼠resistin对COX-2的mRNA水平的调控 | 第56-57页 |
| ·resistin对COX-2蛋白质水平表达的调控 | 第57-58页 |
| ·resistin的抗体对resistin的调控作用的影响 | 第58-59页 |
| 5 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 RESISTIN对炎症信号途径的调控作用 | 第61-71页 |
| 1 前言 | 第61页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第61-62页 |
| ·实验细胞 | 第61页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第61-62页 |
| 3 实验方法 | 第62-63页 |
| ·Western blotting | 第62页 |
| ·质粒的大量提取 | 第62页 |
| ·质粒浓度和纯度检测 | 第62页 |
| ·细胞培养 | 第62页 |
| ·细胞转染 | 第62-63页 |
| ·负显性IκBα突变体载体的构建 | 第63页 |
| 4 结果与分析 | 第63-68页 |
| ·超表达resistin对NF-κB信号途径的影响 | 第63-66页 |
| ·超表达负显性IκBα突变体对resistin调控作用的影响 | 第63-64页 |
| ·抑制剂PDTC对resistin调控作用的影响 | 第64-65页 |
| ·resistin刺激对NF-κB转录表达的影响 | 第65-66页 |
| ·resistin对激酶TAK1表达及活性的影响 | 第66-68页 |
| ·resistin对激酶TAK1转录水平的情况 | 第66-67页 |
| ·resistin对激酶TAK1磷酸化水平的影响 | 第67-68页 |
| 5 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 chemerin-15对炎症反应的抑制作用及其机理 | 第71-79页 |
| 1 前言 | 第71-72页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第72页 |
| ·实验细胞 | 第72页 |
| 3 实验方法 | 第72-73页 |
| ·real-time PCR | 第72页 |
| ·细胞免疫荧光 | 第72-73页 |
| 4 结果与分析 | 第73-78页 |
| ·chemerin-15的抗炎作用 | 第73-75页 |
| ·chemerin-15对LPS所引起的炎症反应的抑制作用 | 第73-74页 |
| ·chemerin-15对PA引起的炎症反应的抑制作用 | 第74页 |
| ·chemerin-15对resistin所引起的炎症反应的抑制作用 | 第74-75页 |
| ·chemerin-15对p65基因表达以及入核的影响 | 第75-78页 |
| ·chemerin-15对P65基因表达的影响 | 第75-76页 |
| ·chemerin-15对P65的入核的影响 | 第76-78页 |
| 5 讨论 | 第78-79页 |
| 结论与创新点 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-93页 |
| 研究生期间论文发表情况 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
