| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 杀鱼爱德华氏菌 | 第10-12页 |
| 1.1.1 杀鱼爱德华氏菌概述 | 第10-11页 |
| 1.1.2 杀鱼爱德华氏菌感染过程 | 第11-12页 |
| 1.2 杀鱼爱德华氏菌的主要毒力系统 | 第12-15页 |
| 1.2.1 Ⅲ型分泌系统 | 第12-13页 |
| 1.2.2 Ⅵ型分泌系统 | 第13-15页 |
| 1.2.3 杀鱼爱德华氏菌T3/T6SS介导的毒力调控网络 | 第15页 |
| 1.3 转座子插入突变体文库测序 | 第15-17页 |
| 1.3.1 转座子插入突变株文库 | 第15-16页 |
| 1.3.2 转座子插入测序(TIS) | 第16-17页 |
| 1.4 脂肪酸代谢 | 第17-22页 |
| 1.4.1 Ⅱ型脂肪酸合成(FASⅡ)途径 | 第18-19页 |
| 1.4.2 不饱和脂肪酸的合成途径 | 第19-20页 |
| 1.4.3 细菌脂肪酸合成的调控蛋白 | 第20-22页 |
| 1.4.4 脂肪酸代谢和毒力调控 | 第22页 |
| 1.5 课题研究内容与意义 | 第22-23页 |
| 第2章 杀鱼爱德华氏菌在海水环境存活的条件必需基因的筛选 | 第23-37页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 实验引物、质粒和菌株 | 第23-25页 |
| 2.2.2 实验培养基及试剂 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 天然海水条件必需基因筛选 | 第25页 |
| 2.3.2 高通量测序文库构建 | 第25-27页 |
| 2.3.3 测序结果分析 | 第27页 |
| 2.3.4 必需基因分析 | 第27-28页 |
| 2.3.5 缺失株构建 | 第28页 |
| 2.3.6 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第28页 |
| 2.3.7 竞争性实验(CI) | 第28-29页 |
| 2.4 实验结果 | 第29-35页 |
| 2.4.1 转座子插入测序分析不同温度海水中E.piscicida的适应性 | 第29-33页 |
| 2.4.2 在16℃海水中T3SS的表达影响E.piscicida的适应性 | 第33-35页 |
| 2.5 结果讨论 | 第35-36页 |
| 2.6 本章小结 | 第36-37页 |
| 第3章 FabR调控杀鱼爱德华氏菌脂肪酸组成 | 第37-55页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第37-44页 |
| 3.2.1 菌株构建 | 第40-41页 |
| 3.2.2 脂肪酸组分分析 | 第41页 |
| 3.2.3 沉降表型实验 | 第41页 |
| 3.2.4 DNase I Footprinting实验 | 第41-42页 |
| 3.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第42页 |
| 3.2.6 Western blot实验 | 第42-43页 |
| 3.2.7 蛋白表达及纯化 | 第43页 |
| 3.2.8 凝胶迁移实验(EMSA) | 第43页 |
| 3.2.9 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第43-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-52页 |
| 3.3.1 FabR影响脂肪酸组成 | 第44-45页 |
| 3.3.2 ChIP-seq菌株的验证 | 第45-46页 |
| 3.3.3 FabR与DNA结合模式 | 第46-50页 |
| 3.3.4 ChIP-seq结果的验证 | 第50-51页 |
| 3.3.5 FabR通过直接结合fabAB调控脂肪酸组分 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 FabR调控基因的分析鉴定 | 第55-61页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第55-56页 |
| 4.2.1 胞外蛋白抽提 | 第55页 |
| 4.2.2 微量热泳动仪(MST) | 第55页 |
| 4.2.3 RNA-seq | 第55-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 4.3.1 RNA-seq数据重复性分析 | 第56-57页 |
| 4.3.2 FabR抑制脂肪酸合成并激活T3/T6SS | 第57-58页 |
| 4.3.3 FabR通过结合esrB调控T3/T6SS | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-60页 |
| 4.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 第5章 FabR调节脂肪酸组分和毒力基因表达的机制 | 第61-68页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第61-63页 |
| 5.2.1 细胞培养和细菌侵染 | 第62-63页 |
| 5.2.2 细胞毒力实验 | 第63页 |
| 5.2.3 细胞免疫荧光染色制片 | 第63页 |
| 5.3 实验结果 | 第63-65页 |
| 5.3.1 FabR在HeLa细胞内激活T3/T6SS基因的表达 | 第63-64页 |
| 5.3.2 FabR与酰基-CoA相互作用的关键氨基酸位点分析 | 第64-65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-67页 |
| 5.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第6章 结论与展望 | 第68-69页 |
| 6.1 主要结论 | 第68页 |
| 6.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间的论文成果 | 第75页 |
