| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| ·普那霉素的研究概述 | 第12-18页 |
| ·普那霉素的化学结构 | 第12-13页 |
| ·普那霉素的理化性质 | 第13-14页 |
| ·普那霉素的抗菌机理 | 第14-15页 |
| ·普那霉素的抗菌活性 | 第15-17页 |
| ·普那霉素的临床应用 | 第17-18页 |
| ·普那霉素基因工程研究概述 | 第18-24页 |
| ·普那霉素Ⅰ生物合成机理 | 第18-21页 |
| ·普那霉素Ⅱ的生物合成机理 | 第21页 |
| ·普那霉素生物合成的调控基因 | 第21-22页 |
| ·普那霉素的抗性基因 | 第22-23页 |
| ·普那霉素生物合成相关基因在基因组中的分布 | 第23-24页 |
| ·抗生素分子育种研究概述 | 第24-28页 |
| ·链霉菌的基因组信息 | 第24-25页 |
| ·操纵调控基因 | 第25页 |
| ·改善限速步骤的基因功能 | 第25-26页 |
| ·增加抗性基因的拷贝数 | 第26-27页 |
| ·改造代谢路径提高目标产物的产量 | 第27页 |
| ·异源表达抗生素生物合成基因 | 第27-28页 |
| ·本论文的研究目标和思路 | 第28-30页 |
| 第二章 普那霉素高产相关基因的筛选 | 第30-45页 |
| ·引言 | 第30-31页 |
| ·材料与方法 | 第31-39页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·要仪器与设备 | 第31-32页 |
| ·生化试剂 | 第32页 |
| ·溶液的配置 | 第32-33页 |
| ·链霉菌菌株培养 | 第33-34页 |
| ·高效液相法(HPLC)测定普那霉素产量 | 第34页 |
| ·基因组DNA的提取及纯化 | 第34-35页 |
| ·基因组DNA的检测 | 第35页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第35页 |
| ·酶切产物和接头的连接 | 第35-36页 |
| ·预扩增反应 | 第36页 |
| ·选择性扩增反应 | 第36-37页 |
| ·特异片段的分离 | 第37页 |
| ·特异片段的克隆和测序 | 第37-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-44页 |
| ·普那霉素高产相关多态性DNA片段的筛选 | 第39-42页 |
| ·普那霉素高产相关多态性DNA片段的克隆和验证 | 第42-43页 |
| ·普那霉素高产相关多态性DNA片段的序列分析 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第三章 始旋链霉菌柯斯基因组文库构建 | 第45-64页 |
| ·引言 | 第45-46页 |
| ·材料与方法 | 第46-55页 |
| ·菌株及质粒 | 第46-47页 |
| ·主要仪器与设备 | 第47页 |
| ·生化试剂 | 第47页 |
| ·抗生素及培养基配制 | 第47页 |
| ·溶液的配置 | 第47-48页 |
| ·构建柯斯基因组文库基本策略 | 第48-49页 |
| ·始旋链霉菌基因DNA35-45kb酶切片段的制备 | 第49-51页 |
| ·基因组DNA酶切片段的去磷酸化 | 第51页 |
| ·柯斯质粒Supercos-1大量制备 | 第51-52页 |
| ·柯斯质粒Supercos-1线性化 | 第52页 |
| ·柯斯质粒DNA的去磷酸化反应 | 第52页 |
| ·柯斯质粒Supercos-1DNA的两臂分离 | 第52-53页 |
| ·柯斯质粒DNA两臂与基因组DNA片段的连接 | 第53页 |
| ·重组柯斯质粒的体外包装 | 第53页 |
| ·重组噬菌体的转染 | 第53-54页 |
| ·包装噬菌体的滴度测定 | 第54页 |
| ·柯斯文库的扩增与保存 | 第54页 |
| ·柯斯文库质量的鉴定 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-62页 |
| ·始旋链霉菌高分子量基因组DNA制备 | 第55-56页 |
| ·始旋链霉菌基因组DNA35-45kb酶切条件 | 第56-58页 |
| ·柯斯质粒Supercos-1的制备与处理 | 第58-59页 |
| ·柯斯质粒与基因组DNA片段的连接,包装和转染 | 第59页 |
| ·柯斯基因组文库质量的鉴定 | 第59-61页 |
| ·柯斯基因组文库转染菌体冻融实验结果 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-64页 |
| 第四章 普那霉素高产相关基因spy1的克隆 | 第64-84页 |
| ·引言 | 第64-65页 |
| ·材料与方法 | 第65-74页 |
| ·菌株及质粒 | 第65页 |
| ·实验仪器与设备 | 第65页 |
| ·生化试剂 | 第65页 |
| ·溶液配制 | 第65-66页 |
| ·基因组文库克隆目的基因技术路线 | 第66-67页 |
| ·地高辛标afsk基因探针制备 | 第67-69页 |
| ·菌落原位杂交 | 第69-70页 |
| ·免疫检测 | 第70页 |
| ·膜的保存 | 第70-71页 |
| ·阳性克隆PCR验证 | 第71页 |
| ·阳性克隆重组质粒酶切图谱分析 | 第71页 |
| ·Southern印迹 | 第71-73页 |
| ·目的基因片段的亚克隆 | 第73-74页 |
| ·目的基因生物信息学分析 | 第74页 |
| ·实验结果 | 第74-83页 |
| ·afsk基因片段获取 | 第74-75页 |
| ·菌落原位杂交 | 第75-77页 |
| ·阳性克隆PCR验证 | 第77-78页 |
| ·阳性重组柯斯质粒酶切图谱分析 | 第78页 |
| ·Southern杂交 | 第78-79页 |
| ·目的基因片段的亚克隆 | 第79-80页 |
| ·目的基因生物信息学分析 | 第80-83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 结论与展望 | 第84-86页 |
| ·研究结论 | 第84页 |
| ·研究展望 | 第84-86页 |
| 论文发表情况 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 附录 | 第94-103页 |