| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 1. 课题研究的背景及意义 | 第9页 |
| 2. 课题研究的目的 | 第9-10页 |
| 3. 本论文主要研究内容 | 第10页 |
| 4. 本论文的创新点 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第11页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的概述 | 第11-14页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的研究现状 | 第11-12页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第12-14页 |
| ·中性内切葡聚糖酶的概述 | 第14-16页 |
| ·中性内切葡聚糖酶的研究现状 | 第14-15页 |
| ·内切葡聚糖酶的应用研究进展 | 第15-16页 |
| ·酶的定向进化及其筛选方法 | 第16-18页 |
| ·易错PCR | 第16-17页 |
| ·DNA 改组 | 第17-18页 |
| ·酶分子定向进化的筛选策略 | 第18页 |
| ·诱变育种方法的研究进展 | 第18-21页 |
| ·紫外诱变 | 第18-19页 |
| ·化学诱变 | 第19-21页 |
| 第二章 β-葡萄糖苷酶基因的突变 | 第21-34页 |
| ·材料与方法 | 第21-23页 |
| ·菌株及质粒 | 第21页 |
| ·药品与酶 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·培养基及主要试剂配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·易错PCR 条件的探索 | 第23-24页 |
| ·目的基因易错PCR 扩增 | 第24页 |
| ·PCR 扩增产物的割胶回收 | 第24-25页 |
| ·易错PCR 扩增产物的双酶切 | 第25页 |
| ·表达载体pTRC99A 的双酶切 | 第25页 |
| ·浓缩 | 第25页 |
| ·连接 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞TOP10F’的制备与转化 | 第26页 |
| ·质粒小量提取 | 第26-27页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第27页 |
| ·重组菌株的筛选 | 第27页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶活测定 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-32页 |
| ·易错PCR 条件的摸索 | 第29-30页 |
| ·目的基因易错PCR 扩增 | 第30页 |
| ·目的基因 bgl1 和载体 pTRC99A 的双酶切 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的提取及阳性表达质粒的筛选 | 第31-32页 |
| ·转化大肠杆菌表达宿主菌 | 第32页 |
| ·随机突变后重组菌蛋白的SDS-PAGE 电泳 | 第32页 |
| ·小结 | 第32-34页 |
| 第三章 β-葡萄糖苷酶基因工程菌的紫外诱变 | 第34-58页 |
| ·材料与方法 | 第34-35页 |
| ·菌株及质粒 | 第34页 |
| ·实验药品 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34页 |
| ·培养基及主要试剂配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-42页 |
| ·出发菌株的确立 | 第35页 |
| ·紫外诱变 | 第35-37页 |
| ·紫外诱变后菌株的筛选 | 第37页 |
| ·诱变后酵母突变株的传代稳定性实验 | 第37-38页 |
| ·诱变前后酵母酶学性质的对比 | 第38页 |
| ·酵母突变株 GS115-bgl1-9 产酶条件的优化 | 第38-39页 |
| ·酵母突变株 GS115-bgl1-9 产酶条件优化的正交试验 | 第39-41页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活力测定方法 | 第41页 |
| ·Coomassie blue 法测定蛋白含量 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-57页 |
| ·紫外诱变出发菌株的确立 | 第42-43页 |
| ·紫外诱变 | 第43-44页 |
| ·紫外诱变后菌株的筛选 | 第44-46页 |
| ·紫外诱变后酵母突变菌株的遗传稳定性实验 | 第46-47页 |
| ·诱变前后酵母酶学性质的对比 | 第47-51页 |
| ·酵母突变株 GS115-bgl1-9 产酶条件的优化 | 第51-55页 |
| ·突变株 GS115-bgl1-9 产酶条件优化的正交试验 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第四章 嗜热液化芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因的突变 | 第58-72页 |
| ·材料与方法 | 第58-59页 |
| ·菌株及质粒 | 第58页 |
| ·药品与酶 | 第58页 |
| ·引物设计 | 第58页 |
| ·培养基及主要试剂配制 | 第58-59页 |
| ·试验方法 | 第59-63页 |
| ·不同载体及不同宿主对内切葡聚糖酶基因表达的影响 | 第59-60页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的易错PCR | 第60页 |
| ·琼脂糖凝胶核酸电泳及目的片段的割胶回收 | 第60页 |
| ·PCR 产物的双酶切 | 第60页 |
| ·表达载体pTRC99A 的双酶切 | 第60-61页 |
| ·表达质粒构建 | 第61页 |
| ·转化大肠杆菌表达宿主菌株 | 第61页 |
| ·刚果红平板法筛选 | 第61页 |
| ·复筛 | 第61页 |
| ·内切葡聚糖酶活力测定 | 第61-63页 |
| ·突变菌株酶学性质的研究 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-71页 |
| ·不同载体及不同宿主对内切葡聚糖酶基因表达的影响 | 第63-65页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的易错PCR | 第65页 |
| ·目的基因和载体pTRC99A 的双酶切 | 第65页 |
| ·表达质粒构建 | 第65页 |
| ·转化大肠杆菌表达宿主菌株 | 第65-66页 |
| ·刚果红平板法筛选 | 第66页 |
| ·随机突变测序结果分析 | 第66-69页 |
| ·突变菌株的酶学性质研究 | 第69-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72页 |
| ·展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 详细摘要 | 第80-83页 |
