| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第10-31页 |
| 1.1 丹参研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1.1 丹参研究意义 | 第10-11页 |
| 1.1.2 丹参基因克隆和分子水平研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2 植物未知基因功能研究策略和方法 | 第15-22页 |
| 1.2.1 生物信息学 | 第15-17页 |
| 1.2.2 基因的表达研究 | 第17-18页 |
| 1.2.3 基因的功能研究手段和思路 | 第18-22页 |
| 1.3 相关基因研究 | 第22-29页 |
| 1.4 选择该未知基因研究的由来和意义 | 第29-31页 |
| 第2章 丹参SmSRP基因的发现、克隆和表达分析以及其他物种同源基因的初步分析 | 第31-54页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第31-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第31页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第31页 |
| 2.1.3 试剂 | 第31-33页 |
| 2.1.4 仪器 | 第33页 |
| 2.2 实验方案和实验步骤 | 第33-42页 |
| 2.2.1 对该未知基因和编码蛋白的基本特征分析 | 第33-34页 |
| 2.2.2 核酸的提取和cDNA获取 | 第34页 |
| 2.2.3 丹参SmSRP和拟南芥同源基因AT2G17350的克隆 | 第34-35页 |
| 2.2.4 丹参SmSRP和拟南芥AT2G17350的原核表达以及western blotting验证 | 第35-38页 |
| 2.2.5 基因的表达分析 | 第38-41页 |
| 2.2.6 其他物种中同源基因的克隆和表达分析 | 第41-42页 |
| 2.3 实验结果 | 第42-54页 |
| 2.3.1 对丹参未知基因SmSRP和编码蛋白的基本特征分析 | 第42-46页 |
| 2.3.2 拟南芥同源基因AT2G17350的功能预测和表达分析 | 第46-49页 |
| 2.3.3 丹参未知基因SmSRP表达初步分析 | 第49-50页 |
| 2.3.4 水稻,大豆和玉米同源基因的克隆和表达初步分析 | 第50-54页 |
| 第3章 丹参SmSRP和拟南芥同源基因AT2G17350的启动子区的克隆和验证 | 第54-75页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第54-62页 |
| 3.1.1 实验试剂和分析网站 | 第54页 |
| 3.1.2 BD Genome Walker~(TM) Libraries的构建 | 第54-55页 |
| 3.1.3 5'和3'侧翼序列的扩增方法 | 第55-57页 |
| 3.1.4 SmSRP5'侧翼序列的克隆验证和载体构建 | 第57-59页 |
| 3.1.5 拟南芥同源基因AT2G17350的启动子区的克隆和载体构建 | 第59页 |
| 3.1.6 农杆菌转化 | 第59-60页 |
| 3.1.7 叶盘转化法转化丹参 | 第60页 |
| 3.1.8 PCR鉴定转基因植株 | 第60-61页 |
| 3.1.9 花粉管通道法转化拟南芥 | 第61-62页 |
| 3.1.10 GUS染色和鉴定 | 第62页 |
| 3.2 实验结果 | 第62-75页 |
| 3.2.1 SmSRP和拟南芥AT2G17350启动子区的克隆和分析 | 第62-66页 |
| 3.2.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第66-68页 |
| 3.2.3 丹参5'不同片段和拟南芥启动子不同发育时期GUS活性的鉴定 | 第68-72页 |
| 3.2.4 不同处理下丹参SmSRP启动子和拟南芥AT2G17350启动子GUS活性 | 第72-75页 |
| 第4章 丹参SmSRP和拟南芥同源基因的的转基因株系获得和验证 | 第75-85页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第75-79页 |
| 4.1.1 试剂和载体 | 第75页 |
| 4.1.2 丹参SmSRP过表达载体和RNAi载体的构建 | 第75-77页 |
| 4.1.3 拟南芥AT2G17350 over-expression载体构建 | 第77-78页 |
| 4.1.4 丹参SmSRP-RNAi转基因株系的获得和分析 | 第78-79页 |
| 4.1.5 拟南芥SmSRP-RNAi | 第79页 |
| 4.1.6 拟南芥突变体的鉴定和筛选 | 第79页 |
| 4.1.7 形态观察和总蛋白含量分析 | 第79页 |
| 4.2 结果分析 | 第79-85页 |
| 4.2.1 丹参转基因株系的获得和形态观察和生理指标确定 | 第79-81页 |
| 4.2.2 拟南芥AT2G17350突变体分析 | 第81-84页 |
| 4.2.3 拟南芥转基因株系和突变体的获得及形态观察和生理指标测定 | 第84-85页 |
| 第5章 拟南芥AT2G17350互作蛋白研究 | 第85-98页 |
| 5.1 材料与方法 | 第85-91页 |
| 5.1.1 材料与试剂 | 第85-86页 |
| 5.1.2 网上数据库分析 | 第86页 |
| 5.1.3 互作基因克隆和载体构建 | 第86-87页 |
| 5.1.4 小量酵母AH109感受态细胞的制备 | 第87页 |
| 5.1.5 酵母细胞的转化 | 第87页 |
| 5.1.6 自激活检测和毒性检测 | 第87-88页 |
| 5.1.7 酵母双杂交验证 | 第88页 |
| 5.1.8 BiFC载体构建 | 第88-90页 |
| 5.1.9 烟草注射 | 第90-91页 |
| 5.1.10 四个互作基因拟南芥突变体的分析 | 第91页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第91-98页 |
| 5.2.1 四个互作基因克隆分析 | 第91-92页 |
| 5.2.2 酵母双杂交 | 第92-95页 |
| 5.2.3 BiFC互作研究 | 第95页 |
| 5.2.4 四个互作基因突变体的分析 | 第95-98页 |
| 第6章 讨论 | 第98-104页 |
| 6.1 SmSRP在丹参逆境胁迫中具有关键作用 | 第98-99页 |
| 6.2 丹参SmSRP、拟南芥AT2G17350和其同源基因在植物发育过程中发挥作用 | 第99-101页 |
| 6.3 丹参SmSRP和拟南芥AT2G17350的相同和不同之处 | 第101-102页 |
| 6.4 丹参SmSRP和拟南芥AT2G17350可能是通过蛋白转运来发挥基因功能 | 第102-103页 |
| 6.5 展望 | 第103-104页 |
| 结论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 攻读博士学位期间研究成果 | 第121页 |
