| 中文摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 中英文缩略名词索引 | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-21页 |
| 第一部分 H.pylori感染通过增强肝素酶的表达导致胃癌MKN-45细胞增殖侵袭转移及其机制 | 第21-53页 |
| 1.实验材料 | 第21-27页 |
| 1.1 实验仪器 | 第21-22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22-24页 |
| 1.3 主要工作液配制 | 第24-27页 |
| 2.实验方法 | 第27-38页 |
| 2.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2 H.pylori培养 | 第28-29页 |
| 2.3 H.pylori与MKN-45细胞共培养 | 第29页 |
| 2.4 SB203580(MAPK抑制剂)的干预 | 第29页 |
| 2.5 细胞转染(HPA1基因沉默) | 第29-30页 |
| 2.6 实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测各组HPA mRNA变化 | 第30-32页 |
| 2.6.1 分组 | 第30页 |
| 2.6.2 实验步骤 | 第30-32页 |
| 2.6.2.1 totalRNA提取 | 第30-31页 |
| 2.6.2.2 反转录(按反转录试剂盒说明书操作) | 第31页 |
| 2.6.2.3 实时荧光定量PCR(操作按照试剂盒说明书进行) | 第31-32页 |
| 2.7 Western blot实验检测HPA蛋白、MAPK蛋白、NF-kB蛋白表达 | 第32-35页 |
| 2.7.1 分组 | 第32页 |
| 2.7.2 实验步骤 | 第32-35页 |
| 2.7.2.1 总蛋白的提取 | 第33页 |
| 2.7.2.2 总蛋白的定量 | 第33页 |
| 2.7.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第33-35页 |
| 2.8 CCK-8实验检测细胞增殖活性 | 第35-36页 |
| 2.9 Transwell实验检测肿瘤细胞侵袭能力 | 第36页 |
| 2.10 划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力 | 第36-37页 |
| 2.11 克隆形成实验 | 第37-38页 |
| 2.12 统计分析 | 第38页 |
| 3.实验结果 | 第38-48页 |
| 3.1 幽门螺旋杆菌(H.pylori)、胃癌细胞MKN-45培养及其共培养 | 第38-40页 |
| 3.1.1 H.pylori菌株NCTC11637的复苏培养和形态 | 第38-39页 |
| 3.1.2 胃癌细胞MKN-45的培养 | 第39页 |
| 3.1.3 MKN-45胃癌细胞与H.pylori菌株共培养及给予干预后细胞的生长状态 | 第39-40页 |
| 3.2 胃癌MKN-45细胞中的HPAmRNA表达使用实时定量RT-PCR(qRT-PCR) | 第40页 |
| 3.3 H.pylori感染MKN-45细胞导致HPA在分子和蛋白水平的变化 | 第40-42页 |
| 3.4 H.pylori感染胃癌MKN-45细胞后通过激活p38MAPK信号途径导致HPA表达的增高 | 第42-44页 |
| 3.5 MAPK抑制剂明显减弱了共培养后HPA的表达 | 第44-46页 |
| 3.6 SiRNA干扰技术沉默HPA后明显降低了H.pylori诱导的HPA表达水平 | 第46-48页 |
| 4.讨论 | 第48-52页 |
| 5.小结 | 第52-53页 |
| 第二部分 肝素酶在H.pylori感染的胃癌中的作用及临床意义 | 第53-76页 |
| 1.试验材料和方法 | 第53-56页 |
| 1.1 标本来源 | 第53-54页 |
| 1.2 实验试剂及相关设备 | 第54-56页 |
| 2.实验方法 | 第56-59页 |
| 2.1 H.pylori感染检测 | 第56-59页 |
| 2.1.1 使用碳13呼气检测仪HY-IREXB检测所有患者有无H.pylori感染 | 第56页 |
| 2.1.2 免疫组化法检测胃癌组织、癌旁组织中H.pylori感染 | 第56-59页 |
| 2.2 免疫组化法检测胃癌组织、癌旁组织中HPA表达、MAPK表达 | 第59页 |
| 2.3 免疫组化阳性结果判断 | 第59页 |
| 3.实验结果 | 第59-73页 |
| 3.1 患者胃组织中H.pylori感染的判定 | 第59-61页 |
| 3.1.1 C13呼气法检测H.pylori感染 | 第59页 |
| 3.1.2 免疫组化法检测胃癌组织、癌旁组织和健康体检者组织H.pylori感染的状态 | 第59-61页 |
| 3.2 HPA和MAPK蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织和健康体检者 | 第61-64页 |
| 3.3 胃癌组织中H.pylori感染明显高于健康体检者 | 第64页 |
| 3.4 H.pylori感染、HPA蛋白和MAPK蛋白表达与胃癌的病理特征的联系 | 第64-67页 |
| 3.4.1 胃癌中H.pylori感染、HPA和MAPK蛋白与病理特征 | 第64-65页 |
| 3.4.2 胃癌中H.pylori感染与HPA蛋白表达的相关性 | 第65-66页 |
| 3.4.3 胃癌中H.pylori感染与MAPK蛋白表达的相关性 | 第66页 |
| 3.4.4 胃癌中HPA蛋白与MAPK蛋白表达的相关性 | 第66-67页 |
| 3.5 H.pylori感染、HPA蛋白表达和预后的关系 | 第67-69页 |
| 3.6 H.pylori感染、MAPK蛋白表达和预后的关系 | 第69-71页 |
| 3.7 COX回归模型预后分析 | 第71-72页 |
| 3.7.1 单因素COX预后回归模型 | 第71-72页 |
| 3.7.2 多因素COX回归模型预后分析 | 第72页 |
| 3.8 统计学结果分析 | 第72-73页 |
| 4.讨论 | 第73-75页 |
| 5.小结 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-91页 |
| 综述 肝素酶在炎症及肿瘤中的作用 | 第91-113页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 在学期间的研究成果 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
