| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第9-20页 |
| 1.1 iPSCs的细胞特性 | 第9-10页 |
| 1.2 诱导多能干细胞技术 | 第10页 |
| 1.3 iPS细胞系的建立 | 第10-15页 |
| 1.3.1 传统建立iPS细胞系的方法 | 第11-12页 |
| 1.3.2 优化建立iPS细胞系的方法 | 第12-14页 |
| 1.3.3 多物种的iPS细胞系建立 | 第14-15页 |
| 1.4 iPSCs形成的分子机制 | 第15-16页 |
| 1.4.1 多能性基因的激活 | 第15页 |
| 1.4.2 多能性基因的转录调控 | 第15页 |
| 1.4.3 表观遗传修饰的重编程 | 第15-16页 |
| 1.4.4 重编程中的细胞信号通路 | 第16页 |
| 1.5 iPSCs的鉴定 | 第16-17页 |
| 1.5.1 形态学检测 | 第16页 |
| 1.5.2 细胞生长特性检测 | 第16页 |
| 1.5.3 碱性磷酸酶活性检测 | 第16-17页 |
| 1.5.4 细胞特异性标记基因表达检测 | 第17页 |
| 1.5.5 全基因组基因表达水平检测 | 第17页 |
| 1.5.6 表观遗传学重编程的检测 | 第17页 |
| 1.5.7 细胞分化潜能的检测 | 第17页 |
| 1.6 iPSCs的应用 | 第17-18页 |
| 1.6.1 疾病模型和药物开发中的应用 | 第18页 |
| 1.6.2 组织器官工程中的应用 | 第18页 |
| 1.6.3 受损组织修复中的应用 | 第18页 |
| 1.7 研究意义 | 第18-20页 |
| 2 绵羊iPS细胞系的建立 | 第20-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验动物、实验细胞、实验质粒以及实验菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂以及药品 | 第20-22页 |
| 2.1.3 实验溶液的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验设备以及仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 多能性诱导因子的准备 | 第23-25页 |
| 2.2.2 实验细胞的准备及培养 | 第25-28页 |
| 2.2.3 诱导重编程因子的脂质体转染 | 第28页 |
| 2.2.4 逆转录病毒的侵染 | 第28页 |
| 2.2.5 iPSCs克隆的挑取 | 第28-29页 |
| 2.2.6 iPSCs的扩增与培养 | 第29-30页 |
| 2.2.7 iPSCs的鉴定 | 第30-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-42页 |
| 2.3.1 诱导因子的准备及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.2 实验细胞的状态 | 第34-35页 |
| 2.3.3 不同饲养层培养iPSCs的比较 | 第35-36页 |
| 2.3.4 脂质体转染法的转染效率 | 第36页 |
| 2.3.5 逆转录病毒的侵染效率 | 第36-37页 |
| 2.3.6 iPSCs克隆的获取时间 | 第37页 |
| 2.3.7 iPSCs的扩增与培养 | 第37-38页 |
| 2.3.8 碱性磷酸酶染色 | 第38-39页 |
| 2.3.9 免疫荧光染色 | 第39页 |
| 2.3.10 甲基化检测 | 第39-41页 |
| 2.3.11 甲基化水平差异 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |