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猪源噬菌体抗体库的构建与抗PRRSV抗体的筛选

摘要第7-9页
Abstract第9-11页
缩略语表第12-14页
第1章 文献综述第14-33页
    1.1 抗体的研究进展第14-23页
        1.1.1 抗体的结构研究第14-18页
        1.1.2 抗体的生物学功能第18-20页
        1.1.3 抗体制备技术的研究第20-21页
        1.1.4 抗体库技术第21-23页
    1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展第23-33页
        1.2.1 PRRSV概述第24-25页
        1.2.2 PRRSV与天然免疫第25-26页
        1.2.3 PRRSV与细胞免疫第26-27页
        1.2.4 PRRSV与体液免疫第27-30页
        1.2.5 PRRSV与自身多反应性抗体第30-31页
        1.2.6 PRRSV与KRT8、MYH9第31-33页
第2章 研究目的与意义第33-34页
第3章 材料与方法第34-61页
    3.1 试验材料第34-41页
        3.1.1 实验动物第34页
        3.1.2 细胞、毒株、疫苗与菌株第34页
        3.1.3 载体与质粒第34-35页
        3.1.4 引物序列第35-36页
        3.1.5 工具酶及主要试剂第36-37页
        3.1.6 培养基与抗生素及其配制第37-38页
        3.1.7 主要缓冲液与相关试剂及其配制第38-40页
        3.1.8 主要仪器设备第40-41页
        3.1.9 分子生物学分析软件第41页
    3.2 试验方法第41-61页
        3.2.1 动物免疫与抗体效价检测第41-43页
        3.2.2 总RNA提取及RT-PCR扩增第43-45页
        3.2.3 PCR产物或酶切产物的回收第45-46页
        3.2.4 噬粒pComb3XSS及scFv连接产物的制备第46-48页
        3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备第48-49页
        3.2.6 辅助噬菌体毒种的制备第49页
        3.2.7 噬菌体抗体库的构建第49-51页
        3.2.8 微孔板筛选法筛选抗体库第51页
        3.2.9 重组噬菌体的鉴定第51-53页
        3.2.10 scFv重组蛋白的表达第53-55页
        3.2.11 scFv结合活性的测定第55页
        3.2.12 scFv中和活性的鉴定第55-57页
        3.2.13 scFv抑制PRRSV增殖的机制第57页
        3.2.14 间接免疫荧光实验第57-58页
        3.2.15 scFv识别蛋白的质谱鉴定第58-60页
        3.2.16 统计学方法第60-61页
第4章 结果与分析第61-90页
    4.1 猪源天然抗体库的构建与抗PRRSV抗体的筛选第61-72页
        4.1.1 PRRSV的扩增与纯化第61页
        4.1.2 猪外周血单核细胞(PBMCs)的分离及cDNA的合成第61-62页
        4.1.3 scFv的扩增第62-63页
        4.1.4 噬粒pComb3XSS及scFv片段的酶切、连接第63-64页
        4.1.5 辅助噬菌体的制备第64页
        4.1.6 猪源天然抗体库的构建第64-68页
        4.1.7 天然抗体库的富集、筛选、鉴定第68-69页
        4.1.8 天然库scFv重组蛋白的表达、纯化、鉴定第69-71页
        4.1.9 天然库scFv中和活性的测定第71-72页
    4.2 猪源免疫抗体库的构建与抗PRRSV抗体的筛选第72-81页
        4.2.1 动物的免疫与抗体效价测定第72-73页
        4.2.2 免疫抗体库的构建第73-77页
        4.2.3 免疫抗体库的富集、筛选、鉴定第77-78页
        4.2.4 免疫库scFv重组蛋白的表达第78-80页
        4.2.5 免疫库scFv中和活性的测定第80-81页
        4.2.6 scFvI-141抑制PRRSV增殖的机制第81页
    4.3 scFv识别蛋白的质谱鉴定与功能研究第81-90页
        4.3.1 IFA验证scFv的反应性第81-83页
        4.3.2 scFv结合蛋白的分离第83页
        4.3.3 scFv结合蛋白的质谱鉴定第83-84页
        4.3.4 scFv结合蛋白的生物信息学分析第84-85页
        4.3.5 KRT8、MYH9的功能研究第85-90页
第5章 讨论与结论第90-97页
    5.1 讨论第90-96页
        5.1.1 实验动物的选择第90-91页
        5.1.2 猪源抗体基因片段的扩增第91-92页
        5.1.3 抗体库的构建第92-93页
        5.1.4 scFv的表达第93-94页
        5.1.5 I-141抑制PRRSV增殖的机制第94页
        5.1.6 多反性抗体、自身反应性抗体第94-96页
    5.2 结论第96-97页
参考文献第97-121页
附录第121-123页
作者简介及在读期间发表文章第123-124页
致谢第124-125页

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