摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略语表 | 第12-14页 |
第1章 文献综述 | 第14-33页 |
1.1 抗体的研究进展 | 第14-23页 |
1.1.1 抗体的结构研究 | 第14-18页 |
1.1.2 抗体的生物学功能 | 第18-20页 |
1.1.3 抗体制备技术的研究 | 第20-21页 |
1.1.4 抗体库技术 | 第21-23页 |
1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 | 第23-33页 |
1.2.1 PRRSV概述 | 第24-25页 |
1.2.2 PRRSV与天然免疫 | 第25-26页 |
1.2.3 PRRSV与细胞免疫 | 第26-27页 |
1.2.4 PRRSV与体液免疫 | 第27-30页 |
1.2.5 PRRSV与自身多反应性抗体 | 第30-31页 |
1.2.6 PRRSV与KRT8、MYH9 | 第31-33页 |
第2章 研究目的与意义 | 第33-34页 |
第3章 材料与方法 | 第34-61页 |
3.1 试验材料 | 第34-41页 |
3.1.1 实验动物 | 第34页 |
3.1.2 细胞、毒株、疫苗与菌株 | 第34页 |
3.1.3 载体与质粒 | 第34-35页 |
3.1.4 引物序列 | 第35-36页 |
3.1.5 工具酶及主要试剂 | 第36-37页 |
3.1.6 培养基与抗生素及其配制 | 第37-38页 |
3.1.7 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第38-40页 |
3.1.8 主要仪器设备 | 第40-41页 |
3.1.9 分子生物学分析软件 | 第41页 |
3.2 试验方法 | 第41-61页 |
3.2.1 动物免疫与抗体效价检测 | 第41-43页 |
3.2.2 总RNA提取及RT-PCR扩增 | 第43-45页 |
3.2.3 PCR产物或酶切产物的回收 | 第45-46页 |
3.2.4 噬粒pComb3XSS及scFv连接产物的制备 | 第46-48页 |
3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
3.2.6 辅助噬菌体毒种的制备 | 第49页 |
3.2.7 噬菌体抗体库的构建 | 第49-51页 |
3.2.8 微孔板筛选法筛选抗体库 | 第51页 |
3.2.9 重组噬菌体的鉴定 | 第51-53页 |
3.2.10 scFv重组蛋白的表达 | 第53-55页 |
3.2.11 scFv结合活性的测定 | 第55页 |
3.2.12 scFv中和活性的鉴定 | 第55-57页 |
3.2.13 scFv抑制PRRSV增殖的机制 | 第57页 |
3.2.14 间接免疫荧光实验 | 第57-58页 |
3.2.15 scFv识别蛋白的质谱鉴定 | 第58-60页 |
3.2.16 统计学方法 | 第60-61页 |
第4章 结果与分析 | 第61-90页 |
4.1 猪源天然抗体库的构建与抗PRRSV抗体的筛选 | 第61-72页 |
4.1.1 PRRSV的扩增与纯化 | 第61页 |
4.1.2 猪外周血单核细胞(PBMCs)的分离及cDNA的合成 | 第61-62页 |
4.1.3 scFv的扩增 | 第62-63页 |
4.1.4 噬粒pComb3XSS及scFv片段的酶切、连接 | 第63-64页 |
4.1.5 辅助噬菌体的制备 | 第64页 |
4.1.6 猪源天然抗体库的构建 | 第64-68页 |
4.1.7 天然抗体库的富集、筛选、鉴定 | 第68-69页 |
4.1.8 天然库scFv重组蛋白的表达、纯化、鉴定 | 第69-71页 |
4.1.9 天然库scFv中和活性的测定 | 第71-72页 |
4.2 猪源免疫抗体库的构建与抗PRRSV抗体的筛选 | 第72-81页 |
4.2.1 动物的免疫与抗体效价测定 | 第72-73页 |
4.2.2 免疫抗体库的构建 | 第73-77页 |
4.2.3 免疫抗体库的富集、筛选、鉴定 | 第77-78页 |
4.2.4 免疫库scFv重组蛋白的表达 | 第78-80页 |
4.2.5 免疫库scFv中和活性的测定 | 第80-81页 |
4.2.6 scFvI-141抑制PRRSV增殖的机制 | 第81页 |
4.3 scFv识别蛋白的质谱鉴定与功能研究 | 第81-90页 |
4.3.1 IFA验证scFv的反应性 | 第81-83页 |
4.3.2 scFv结合蛋白的分离 | 第83页 |
4.3.3 scFv结合蛋白的质谱鉴定 | 第83-84页 |
4.3.4 scFv结合蛋白的生物信息学分析 | 第84-85页 |
4.3.5 KRT8、MYH9的功能研究 | 第85-90页 |
第5章 讨论与结论 | 第90-97页 |
5.1 讨论 | 第90-96页 |
5.1.1 实验动物的选择 | 第90-91页 |
5.1.2 猪源抗体基因片段的扩增 | 第91-92页 |
5.1.3 抗体库的构建 | 第92-93页 |
5.1.4 scFv的表达 | 第93-94页 |
5.1.5 I-141抑制PRRSV增殖的机制 | 第94页 |
5.1.6 多反性抗体、自身反应性抗体 | 第94-96页 |
5.2 结论 | 第96-97页 |
参考文献 | 第97-121页 |
附录 | 第121-123页 |
作者简介及在读期间发表文章 | 第123-124页 |
致谢 | 第124-125页 |