| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 植物自交不亲和概述 | 第12页 |
| 1.2 芸薹属孢子体自交不亲和的元件 | 第12-17页 |
| 1.2.1 S位点基因SLG、SRK和SCR | 第12-14页 |
| 1.2.2 其他非连锁重要功能基因 | 第14-17页 |
| 1.3 孢子体型自交不亲和信号传导网络 | 第17-18页 |
| 1.4 蛋白质相互作用常用研究方法 | 第18-22页 |
| 1.4.1 酵母双杂交技术 | 第18-20页 |
| 1.4.2 免疫共沉淀技术 | 第20页 |
| 1.4.3 GST-pulldown技术 | 第20页 |
| 1.4.4 双分子荧光互补技术 | 第20-22页 |
| 第2章 引言 | 第22-24页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 2.2 研究内容 | 第23页 |
| 2.3 技术路线 | 第23-24页 |
| 第3章 甘蓝、芜菁中SI相关元件的克隆与表达分析 | 第24-39页 |
| 3.1 材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 3.1.2 主要生化试剂 | 第24页 |
| 3.1.3 菌株和载体 | 第24页 |
| 3.1.4 培养基和溶液 | 第24-25页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第25页 |
| 3.2 方法 | 第25-31页 |
| 3.2.1 甘蓝总RNA的提取 | 第25页 |
| 3.2.2 合成cDNA第一链 | 第25-26页 |
| 3.2.3 引物设计 | 第26-27页 |
| 3.2.4 基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2.5 PCR产物回收 | 第28页 |
| 3.2.6 回收产物连接T载体并转化大肠杆菌 | 第28-29页 |
| 3.2.7 各基因表达的分析 | 第29-31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-37页 |
| 3.3.1 SI基因的克隆与序列分析 | 第31-36页 |
| 3.3.2 SI相关元件的荧光定量表达分析 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第4章 MLPK诱饵蛋白构建及其与ARC1互作验证 | 第39-51页 |
| 4.1 材料 | 第39页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 4.1.2 主要生化试剂 | 第39页 |
| 4.1.3 菌株和载体 | 第39页 |
| 4.1.4 培养基和溶液 | 第39页 |
| 4.2 方法 | 第39-44页 |
| 4.2.1 MLPK及ARC1短截体的克隆 | 第39-40页 |
| 4.2.2 酵母载体重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| 4.2.3 酵母AH109感受态的制备和转化 | 第41页 |
| 4.2.4 酵母质粒的毒性和自激活检测 | 第41-42页 |
| 4.2.5 蛋白相互作用的酵母双杂交检测 | 第42页 |
| 4.2.6 MLPK亚细胞定位短截体的克隆 | 第42页 |
| 4.2.7 亚细胞定位载体重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| 4.2.8 重组表达载体转化农杆菌感受态细胞 | 第43页 |
| 4.2.9 农杆菌侵染洋葱表皮 | 第43-44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-50页 |
| 4.3.1 酵母重组质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.2 酵母重组质粒的毒性和自激活检测 | 第45-46页 |
| 4.3.3 酵母重组质粒的酵母双杂交检测 | 第46-48页 |
| 4.3.4 亚细胞定位载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.3.5 MLPK短截体在洋葱表皮的亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 第5章 芸薹属PUB家族基因的全基因鉴定 | 第51-61页 |
| 5.1 材料 | 第51页 |
| 5.2 方法 | 第51-52页 |
| 5.2.1 PUB基因的获取和保守结构域分析 | 第51页 |
| 5.2.2 PUB家族基因的生物信息学分析 | 第51页 |
| 5.2.3 8个BoPUB基因的臂重复区在柱头的表达情况 | 第51-52页 |
| 5.3 结果 | 第52-59页 |
| 5.3.1 甘蓝、芜菁、拟南芥、琴叶拟南芥PUB家族基因的获取 | 第52页 |
| 5.3.2 PUB家族基因的结构域分类 | 第52-54页 |
| 5.3.3 甘蓝U-box保守结构域分析 | 第54-56页 |
| 5.3.4 甘蓝和芜菁PUB基因的染色体定位分析 | 第56-57页 |
| 5.3.5 四个物种的U-box+ARM结构域进化分析 | 第57-58页 |
| 5.3.6 8个BoPUB基因的ARM区段在柱头内的表达情况 | 第58-59页 |
| 5.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第6章 MLPK诱饵蛋白筛选与其互作的甘蓝PUB成员 | 第61-70页 |
| 6.1 材料 | 第61页 |
| 6.2 方法 | 第61-63页 |
| 6.2.1 BoPUB成员的生物信息学分析 | 第61页 |
| 6.2.2 BoPUB成员臂重复区短截体的克隆 | 第61-62页 |
| 6.2.3 酵母载体重组质粒的构建 | 第62页 |
| 6.2.4 AH109感受态的制备和转化 | 第62页 |
| 6.2.5 毒性和自激活检测 | 第62页 |
| 6.2.6 酵母双杂交检测 | 第62-63页 |
| 6.3 结果与分析 | 第63-68页 |
| 6.3.1 BoPUB成员的生物信息学分析 | 第63-64页 |
| 6.3.2 酵母载体重组质粒的构建 | 第64-65页 |
| 6.3.3 酵母重组质粒的毒性和自激活检测 | 第65-66页 |
| 6.3.4 与MLPK互作的BoPUB家族基因的筛选 | 第66-68页 |
| 6.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第7章 结论与展望 | 第70-71页 |
| 7.1 结论 | 第70页 |
| 7.1.1 甘蓝、芜菁SI相关元件的克隆与表达分析 | 第70页 |
| 7.1.2 基于MLPK的诱饵蛋白表达体系的成功建立 | 第70页 |
| 7.1.3 四个物种的PUB家族基因的全基因组鉴定 | 第70页 |
| 7.1.4 MLPK诱饵蛋白筛选与其互作的甘蓝PUB成员 | 第70页 |
| 7.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-88页 |
