Abstract (In Chinese) | 第6-7页 |
Abstract (In English) | 第7-8页 |
List of Abbreviations | 第13-15页 |
Chapter Ⅰ General Introduction | 第15-33页 |
1.1 Olfaction | 第15-16页 |
1.2 Insect olfaction | 第16页 |
1.3 Molecular basis of insect olfaction | 第16-18页 |
1.4 Peripheral events in insect olfaction | 第18-26页 |
1.4.1 Odorant binding protein (OBP) | 第19-25页 |
1.4.1.1 Classification of OBPs | 第19-20页 |
1.4.1.2 Insect OBPs structure | 第20-23页 |
1.4.1.3 Functions of OBPs | 第23-25页 |
1.4.2 Membrane Protein | 第25-26页 |
1.5 Odor coding and olfactory signal transduction | 第26-29页 |
1.6 Odor processing in sensory organs | 第29页 |
1.7 The Macrocentrus cingulm Brischke | 第29-30页 |
1.8 M. cingulum olfaction system and odorant protein binding assay | 第30-32页 |
1.9 Research significance and objectives | 第32-33页 |
Chapter Ⅱ: Gene set of Olfactory Proteins in the Polyembryonic Endoparasitoid Macrocentrus cingulum | 第33-68页 |
2.1 Introduction | 第33-35页 |
2.2 Material and Methods | 第35-46页 |
2.2.1 Insects | 第35-36页 |
2.2.2 Extraction of total RNA | 第36-37页 |
2.2.3 Antennal transcriptome generations | 第37页 |
2.2.4 Gene identification and annotation | 第37-38页 |
2.2.5 Phylogenetic analysis | 第38页 |
2.2.6 RT-PCR analysis | 第38-44页 |
2.2.7 Quantitative real-time PCR measurement | 第44-46页 |
2.3 Results | 第46-63页 |
2.3.1 Sequencing and assembly | 第46页 |
2.3.2 Functional Annotation | 第46-50页 |
2.3.3 Identification of olfactory gene families | 第50-61页 |
2.3.3.1 Odorant binding proteins | 第50页 |
2.3.3.2 Chemosensory proteins | 第50-52页 |
2.3.3.3 Odorant receptors | 第52-58页 |
2.3.3.4 Gustatory receptors | 第58-59页 |
2.3.3.5 Ionotropic receptors | 第59-61页 |
2.3.4 Tissue and sex specific expression profile of candidate Macrocentrus cingulum chemosensory receptors | 第61-63页 |
2.4 Discussion | 第63-68页 |
Chapter Ⅲ: Thermal Stability and Binding Affinity of Two Odorant Binding Proteins in Macrocentrus cingulum | 第68-83页 |
3.1 Introduction | 第68-69页 |
3.2 Materials and Methods | 第69-74页 |
3.2.1 Insects culture | 第69-70页 |
3.2.2 Total RNA isolation and cDNA synthesis | 第70页 |
3.2.3 Polymerase chain reaction (PCR) | 第70页 |
3.2.4 Cloning and sequencing | 第70-71页 |
3.2.5 Expression pattern with RTq-PCR | 第71页 |
3.2.6 Cloning of McinOBP-wild types in expression vectors | 第71页 |
3.2.7 Purification of proteins | 第71-72页 |
3.2.8 Preparation of site-directed mutants | 第72页 |
3.2.9 Selection of corn odorants | 第72-73页 |
3.2.10. Circular dichroism (CD) measurements | 第73页 |
3.2.11. Thermal stability measurements with CD | 第73-74页 |
3.3 Results | 第74-81页 |
3.3.1 Cloning and sequence analysis of McinOBP2 and McinOBP3 | 第74页 |
3.3.2 Tissues expression of McinOBP2 and McinOBP3 in M. cingulum | 第74-75页 |
3.3.3 Secondary structure content prediction | 第75-76页 |
3.3.4 Thermal stability of wild type and mutant type | 第76-77页 |
3.3.5 Odorant affinity with wild type and mutant | 第77-81页 |
3.4 Discussion | 第81-83页 |
Chapter Ⅳ: C-terminus a Methionene Specifically Involved in Binding Corn Odorants to McinOBP4 | 第83-96页 |
4.1 Introduction | 第83-84页 |
4.2 Materials and Methods | 第84-88页 |
4.2.1 Sample collection and RNA extraction | 第84-85页 |
4.2.2 Polymerase chain reaction (PCR) | 第85页 |
4.2.3 Cloning and sequencing | 第85页 |
4.2.4 McinOBP4 expression and purification | 第85-86页 |
4.2.5 Preparation of mutants | 第86页 |
4.2.6 Distribution pattern of McinOBP4 | 第86-87页 |
4.2.7 Fluorescence measurements | 第87页 |
4.2.8 Competitive binding assay | 第87页 |
4.2.9 Dissociation constants (K_D) calculation | 第87页 |
4.2.10 Molecular modelling | 第87-88页 |
4.3 Results | 第88-93页 |
4.3.1 Characteristics of McinOBP4 protein | 第88-89页 |
4.3.2 Tissue distribution specificity of McinOBP4 | 第89页 |
4.3.3 Ligand-binding of recombinant McinOBP4-Wt | 第89-91页 |
4.3.4 Mutant binding assay | 第91-92页 |
4.3.5 Molecular modeling | 第92-93页 |
4.4 Discussion | 第93-96页 |
General Conclusion | 第96-98页 |
References | 第98-120页 |
Acknowledgement | 第120-122页 |
Resume | 第122-128页 |