| 致谢 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 水稻细菌性褐条病概况 | 第12-14页 |
| 1.1.1 发生与危害 | 第12页 |
| 1.1.2 病原 | 第12-13页 |
| 1.1.3 病害症状 | 第13页 |
| 1.1.4 发病条件及侵染循环 | 第13页 |
| 1.1.5 防治 | 第13-14页 |
| 1.2 水稻褐条病菌的致病机制 | 第14-20页 |
| 1.2.1 致病相关因子 | 第14页 |
| 1.2.2 分泌系统 | 第14-20页 |
| 2 研究内容与目的意义 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第21-23页 |
| 3.1.2 主要试剂(盒)、酶及抗生素 | 第23页 |
| 3.1.3 培养基及缓冲液 | 第23-24页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 3.3 同源重组法 | 第25页 |
| 3.4 突变体的构建 | 第25-31页 |
| 3.4.1 菌株准备 | 第25-26页 |
| 3.4.2 引物设计 | 第26页 |
| 3.4.3 目的基因片段扩增 | 第26-27页 |
| 3.4.4 双酶切获取目的片段 | 第27页 |
| 3.4.5 目的片段与自杀质粒片段连接 | 第27-28页 |
| 3.4.6 重组质粒的提取与酶切验证 | 第28页 |
| 3.4.7 大肠杆菌感受态的制备及热击 | 第28-29页 |
| 3.4.7.1 受体菌的培养 | 第28-29页 |
| 3.4.7.2 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第29页 |
| 3.4.7.3 热激转化 | 第29页 |
| 3.4.8 重组质粒基因突变菌株的筛选与鉴定 | 第29-30页 |
| 3.4.9 电击感受态的制备与电击 | 第30-31页 |
| 3.4.9.1 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 3.4.9.2 电击转化 | 第30-31页 |
| 3.4.10 基因突变菌株的筛选、鉴定与保存 | 第31页 |
| 3.5 构建敲除突变体的回补体 | 第31-37页 |
| 3.5.1 回补基因的选择 | 第31页 |
| 3.5.2 实验准备 | 第31-32页 |
| 3.5.3 引物设计 | 第32页 |
| 3.5.4 回补体目的基因片段扩增 | 第32页 |
| 3.5.5 双酶切pRADK质粒 | 第32-33页 |
| 3.5.6 同源重组质粒的构建和鉴定 | 第33-34页 |
| 3.5.7 大肠杆菌S17感受态的制备及热击 | 第34-35页 |
| 3.5.7.1 受体菌的培养 | 第34页 |
| 3.5.7.2 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第34页 |
| 3.5.7.3 热激转化 | 第34-35页 |
| 3.5.8 重组质粒基因突变菌株的筛选与鉴定 | 第35页 |
| 3.5.9 电击感受态的制备与电击 | 第35-36页 |
| 3.5.9.1 感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 3.5.9.2 电击转化 | 第36页 |
| 3.5.10 回补体菌株的筛选、鉴定与保存 | 第36-37页 |
| 3.6 突变体和回补体菌株毒力相关表型的测定 | 第37-40页 |
| 3.6.1 致病性测定 | 第37页 |
| 3.6.2 生长测定 | 第37页 |
| 3.6.3 生物膜形成测定 | 第37-38页 |
| 3.6.4 游动性测定 | 第38页 |
| 3.6.5 Hcp蛋白分泌的酶联免疫吸附(ELISA)测定 | 第38-40页 |
| 4 实验结果与分析 | 第40-65页 |
| 4.1 T6SS基因的预测 | 第40-44页 |
| 4.2 T6SS突变体的构建 | 第44-46页 |
| 4.2.1 T6SS基因的目的片段的扩增 | 第44页 |
| 4.2.2 T6SS基因重组自杀质粒的构建 | 第44-45页 |
| 4.2.3 T6SS基因突变株的筛选和鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3 T6SS回补体的构建 | 第46-48页 |
| 4.3.1 T6SS基因目的片段的扩增 | 第46-47页 |
| 4.3.2 T6SS回补基因重组自杀质粒的构建 | 第47页 |
| 4.3.3 T6SS基因回补体的筛选和鉴定 | 第47-48页 |
| 4.4 水稻幼苗致病性 | 第48-52页 |
| 4.5 突变体和回补体生长曲线 | 第52-55页 |
| 4.6 生物膜形成 | 第55-56页 |
| 4.7 游动性 | 第56-61页 |
| 4.8 Hcp蛋白分泌 | 第61-65页 |
| 5 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
