| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-24页 |
| 1.1 丙酸杆菌简介 | 第8-10页 |
| 1.1.1 丙酸秆菌的特性 | 第8-9页 |
| 1.1.2 丙酸杆菌的安全性 | 第9-10页 |
| 1.2 维生素B_(12) | 第10-24页 |
| 1.2.1 维生素B_(12)概述 | 第10-12页 |
| 1.2.2 维生素B_(12)的生理功能 | 第12页 |
| 1.2.3 VB_(12)的来源及生产菌种 | 第12-13页 |
| 1.2.4 VB_(12)的生产菌种 | 第13页 |
| 1.2.5 VB_(12)的应用及市场前景 | 第13-14页 |
| 1.2.6 维生素B_(12)的生产概况 | 第14-15页 |
| 1.2.7 维生素B_(12)的生物合成 | 第15-19页 |
| 1.2.8 VB_(12)生物合成相关的基因 | 第19-20页 |
| 1.2.9 聚合酶链式反应技术 | 第20-21页 |
| 1.2.10 16SrDNA | 第21-23页 |
| 1.2.11 本课题的研究工作 | 第23-24页 |
| 1.2.11.1 本课题的研究内容 | 第23页 |
| 1.2.11.2 本课题的研究意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验仪器 | 第24页 |
| 2.2 实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.3 实验菌种和培养基 | 第26-27页 |
| 2.3.1 实验菌种 | 第26页 |
| 2.3.2 实验培养基 | 第26-27页 |
| 2.4 实验过程 | 第27-38页 |
| 2.4.1 奶酪中丙酸杆菌的分离和初步鉴定 | 第27-31页 |
| 2.4.2 液氮研磨法提取丙酸杆菌染色体DNA | 第31页 |
| 2.4.3 碱裂解法提质粒 | 第31-32页 |
| 2.4.4 引物设计 | 第32页 |
| 2.4.5 PCR扩增目的片段 | 第32-33页 |
| 2.4.6 PCR产物电泳检测及切胶纯化 | 第33页 |
| 2.4.7 纯化后的PCR产物与pMD19-T vector连接 | 第33-34页 |
| 2.4.8 大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第34-35页 |
| 2.4.9 蓝白斑筛选和重组质粒提取 | 第35-36页 |
| 2.4.10 目的片段cbiB的获得 | 第36页 |
| 2.4.11 穿梭质粒pKHEM04的提取及双酶切 | 第36页 |
| 2.4.12 目的片段cbiB与质粒pKHEM04的连接 | 第36-37页 |
| 2.4.13 转化含有cbiB片段的质粒pKHM04 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-48页 |
| 3.1 实验结果 | 第38-46页 |
| 3.1.1 丙酸杆菌的分离和初步鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.2 引物设计 | 第39-41页 |
| 3.1.3 PCR产物电泳检测 | 第41-42页 |
| 3.1.4 PCR产物切胶纯化 | 第42-43页 |
| 3.1.5 TA克隆及蓝白斑筛选 | 第43-44页 |
| 3.1.6 Ase I和BspH I双酶切含有cbiB的T-vector | 第44-45页 |
| 3.1.7 Nde I和Nco I双酶消化穿梭载体pHKEM04 | 第45页 |
| 3.1.8 pKHEM04&cbiB的切胶纯化 | 第45-46页 |
| 3.1.9 目的基因cbiB与穿梭载体pKHEM04的连接 | 第46页 |
| 3.2 实验讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
