| 符号说明 | 第6-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 1.前言 | 第18-30页 |
| 1.1 ALV-J与REV共感染的研究进展 | 第18-23页 |
| 1.1.1 ALV-J的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.1.2 REV的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.1.2.1 REV的致病性 | 第21-22页 |
| 1.1.3 ALV-J与REV共感染的流行病学 | 第22页 |
| 1.1.4 ALV-J与REV共感染的致病性 | 第22-23页 |
| 1.2 病毒之间协同感染机制的研究进展 | 第23页 |
| 1.3 MIRNA在病毒感染中的作用 | 第23-26页 |
| 1.3.1 miRNA的功能 | 第23-24页 |
| 1.3.2 miRNA与病毒的关系 | 第24页 |
| 1.3.3 miRNA对肿瘤形成的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.3.4 miR-147对肿瘤形成的研究进展 | 第26页 |
| 1.4 NF-ΚB/KIAA1199/EGFR信号通路对肿瘤形成的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.4.1 KIAA1199对肿瘤形成的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4.2 NF-κB与EGFR信号通路对肿瘤形成的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 2.材料与方法 | 第30-45页 |
| 2.1 主要试剂及耗材 | 第30-31页 |
| 2.2 主要缓冲液 | 第31页 |
| 2.3 主要仪器 | 第31页 |
| 2.4 细胞及毒株 | 第31-33页 |
| 2.4.1 CEF的制作 | 第32页 |
| 2.4.2 细胞的传代培养 | 第32页 |
| 2.4.3 细胞的接毒 | 第32页 |
| 2.4.4 病毒TCID50的检测 | 第32-33页 |
| 2.5 ALV-J与REV共感染SPF鸡模型的建立 | 第33-34页 |
| 2.5.1 尿囊腔接种 | 第33页 |
| 2.5.2 ALV-Jp27抗原的检测 | 第33页 |
| 2.5.3 REV抗原的检测 | 第33页 |
| 2.5.4 鸡体重及免疫指数的测定 | 第33-34页 |
| 2.5.5 组织病理学观察 | 第34页 |
| 2.5.6 组织内ALV-J和REV病毒载量的测定 | 第34页 |
| 2.5.7 组织内KIAA1199的测定 | 第34页 |
| 2.5.8 组织内NF-κB活性的测定 | 第34页 |
| 2.5.9 组织内EGFR的测定 | 第34页 |
| 2.6 ALV-J与REV共感染的ITRAQ质谱定量分析 | 第34-36页 |
| 2.6.1 iTRAQ肽段标记 | 第34-35页 |
| 2.6.2 肽段分级 | 第35页 |
| 2.6.3 液相色谱(LC)-电喷雾电离(ESI)串联存储(MS/MS)质谱分析(LC-MS/MS) | 第35-36页 |
| 2.6.4 序列数据库查询及数据分析 | 第36页 |
| 2.7 ALV-J与REV共感染的MICRORNA表达谱分析 | 第36-38页 |
| 2.7.1 RNA样本检测 | 第36页 |
| 2.7.2 文库构建和上机测序 | 第36页 |
| 2.7.3 microRNA信息分析 | 第36-38页 |
| 2.8 负染电镜观察 | 第38页 |
| 2.9 CCK-8对细胞增殖的检测 | 第38-39页 |
| 2.10 RNA的提取及反转录 | 第39-40页 |
| 2.11 荧光定量PCR | 第40-42页 |
| 2.12 蛋白质免疫印迹 | 第42-44页 |
| 2.13 免疫组化 | 第44页 |
| 2.14 统计分析 | 第44-45页 |
| 3.结果与分析 | 第45-72页 |
| 3.1 ALV-J与REV共感染协同促进病毒的复制和细胞的生存 | 第45-47页 |
| 3.1.1 ALV-J与REV共感染协同促进REV的复制 | 第45-46页 |
| 3.1.2 ALV-J与REV共感染协同促进ALV-Jgp85和REVenv蛋白的表达 | 第46-47页 |
| 3.1.3 ALV-J与REV共感染协同促进细胞的生存 | 第47页 |
| 3.2 ALV-J与REV共感染协同加剧病理变化并促进肿瘤生成 | 第47-52页 |
| 3.2.1 ALV-J与REV共感染引起鸡胚非特异死亡 | 第47-48页 |
| 3.2.2 ALV-J与REV共感染引起鸡免疫抑制与生长迟缓 | 第48-49页 |
| 3.2.3 ALV-J与REV共感染在各组织器官中促进病毒的复制 | 第49-50页 |
| 3.2.4 ALV-J与REV共感染协同加剧病理变化 | 第50-51页 |
| 3.2.5 ALV-J与REV共感染协同促进肿瘤生成 | 第51-52页 |
| 3.3 ALV-J与REV共感染协同激活新的原癌基因KIAA1199和抑制MIR-147的表达 | 第52-59页 |
| 3.3.1 ALV-J与REV共感染的iTRAQ蛋白组学分析 | 第52-53页 |
| 3.3.2 ALV-J与REV共感染的microRNA表达谱分析 | 第53-54页 |
| 3.3.3 ALV-J与REV共感染协同激活KIAA1199的表达 | 第54-58页 |
| 3.3.4 ALV-J与REV共感染协同抑制miR-147的表达 | 第58-59页 |
| 3.4 MIR-147靶向调节KIAA1199的3’UTR区 | 第59-62页 |
| 3.5 ALV-J与REV共感染通过促进NF-ΚB和EGFR信号通路激活KIAA | 第62-68页 |
| 3.5.1 ALV-J与REV共感染协同上调NF-κB和EGFR相关蛋白 | 第62-65页 |
| 3.5.2 在ALV-J与REV共感染过程中NF-κB、KIAA1199和EGFR这三者关系的验证 | 第65-68页 |
| 3.6 MIR-147靶向调节的NF-ΚBP503’UTR区 | 第68-70页 |
| 3.7 ALV-J与REV共感染协同激活KIAA1199和抑制MIR-147的分子机制图 | 第70-72页 |
| 4.讨论 | 第72-80页 |
| 4.1 ALV-J与REV共感染协同促进病毒复制与肿瘤生成 | 第72-75页 |
| 4.2 MIR-147靶向NF-ΚBP50和KIAA1199的3’UTR区来调节KIAA | 第75-76页 |
| 4.3 ALV-J与REV共感染通过激活NF-ΚB/KIAA1199/EGFR信号通路来促进肿瘤生成 | 第76-80页 |
| 5.结论 | 第80-81页 |
| 6.参考文献 | 第81-97页 |
| 7.致谢 | 第97-98页 |
| 8.攻读学位期间发表论文及专利情况 | 第98-99页 |
