| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 双峰驼概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 双峰驼特性 | 第12页 |
| 1.1.2 双峰驼相关研究 | 第12-13页 |
| 1.2 细胞色素P450概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 细胞色素P450特性 | 第13页 |
| 1.2.2 细胞色素P450的命名规则 | 第13页 |
| 1.2.3 细胞色素P450的结构特征 | 第13-14页 |
| 1.2.4 细胞色素P450作用机制 | 第14-15页 |
| 1.3 CYP2J酶概述 | 第15-16页 |
| 1.3.1 CYP2J酶种类 | 第15页 |
| 1.3.2 CYP2J酶的表达分布 | 第15页 |
| 1.3.3 CYP2J的代谢作用 | 第15-16页 |
| 1.3.4 CYP2J的生理功能 | 第16页 |
| 1.4 cDNA末端快速克隆技术(RACE)概述 | 第16-19页 |
| 1.4.1 RACE技术的特点 | 第16-17页 |
| 1.4.2 RACE技术原理 | 第17-18页 |
| 1.4.3 RACE技术的应用前景 | 第18-19页 |
| 1.5 生物信息学概述 | 第19-20页 |
| 1.5.1 生物信息学的发展 | 第19页 |
| 1.5.2 生物信息学的应用 | 第19-20页 |
| 1.6 蛋白表达与纯化 | 第20-21页 |
| 1.6.1 蛋白原核表达系统 | 第20页 |
| 1.6.2 蛋白纯化 | 第20-21页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 双峰驼CYP2J完整cDNA的克隆及生物信息学分析 | 第22-43页 |
| 2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要溶液和培养基的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 实验内容和方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2 双峰驼总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 RACE实验第一链cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.4 双峰驼CYP2J基因的3'RACE和5'RACE扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.5 RACE产物的检测与纯化 | 第28页 |
| 2.2.6 RACE产物In-Fusion克隆及测序 | 第28-29页 |
| 2.2.7 双峰驼CYP2J基因开放阅读框的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.8 RT-PCR产物的检测和纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.9 目的片段的连接、转化和鉴定 | 第31页 |
| 2.2.10 双峰驼CYP2J蛋白的生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.3 结果 | 第32-41页 |
| 2.3.1 双峰驼总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.2 双峰驼CYP2J基因的RACE克隆 | 第33-34页 |
| 2.3.3 重组载体pAT2-CYP2J的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 双峰驼CYP2J基因的生物信息学分析 | 第35-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-42页 |
| 2.5 小结 | 第42-43页 |
| 3 双峰驼CYP2J基因的原核表达及纯化 | 第43-58页 |
| 3.1 实验材料、仪器和方法 | 第43-46页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第44页 |
| 3.1.4 主要溶液和培养基的配制 | 第44-46页 |
| 3.2 实验内容和方法 | 第46-52页 |
| 3.2.1 目的基因合成 | 第46-48页 |
| 3.2.2 表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.3 重组表达载体的转化与鉴定 | 第49页 |
| 3.2.4 蛋白的表达 | 第49-50页 |
| 3.2.5 蛋白样品的SDS-PAGE检测 | 第50页 |
| 3.2.6 蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 3.2.7 蛋白纯化后的SDS-PAGE和Westernblot检测 | 第51-52页 |
| 3.2.8 蛋白纯化后的浓度测定 | 第52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-57页 |
| 3.3.1 CYP2J基因的合成 | 第52-53页 |
| 3.3.2 原核表达载体pET21a-CYP2J的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.3 pET21a-CYP2J蛋白的表达 | 第54页 |
| 3.3.4 融合蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.5 纯化蛋白的Westernblot鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.6 蛋白纯化后浓度的测定 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-58页 |
| 3.5 小结 | 第58页 |
| 4 全文结论 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
