| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 以H_2O_2为底物的酶催化环氧化反应 | 第13页 |
| 1.1.1 最经济环保的氧化剂H_2O | 第13页 |
| 1.1.2 环氧化合物 | 第13页 |
| 1.2 酶法制备环氧化合物 | 第13-14页 |
| 1.2.1 单加氧酶制备环氧化合物 | 第13-14页 |
| 1.2.2 过氧化物酶制备环氧化合物 | 第14页 |
| 1.2.3 过氧核酶制备环氧化合物 | 第14页 |
| 1.2.4 脂肪酶制备环氧化合物 | 第14页 |
| 1.3 提高酶耐受H_2O_2能力的方法 | 第14-16页 |
| 1.3.1 H_2O_2浓度控制法 | 第15页 |
| 1.3.2 基质改造法 | 第15页 |
| 1.3.3 溶剂工程法 | 第15页 |
| 1.3.4 物理-化学修饰法 | 第15-16页 |
| 1.3.4.1 固定化物理法 | 第15-16页 |
| 1.3.4.2 化学修饰法 | 第16页 |
| 1.3.5 分子改造法 | 第16页 |
| 1.4 脂肪酶简介 | 第16-17页 |
| 1.4.1 脂肪酶的结构特点 | 第17页 |
| 1.4.2 偏甘油酯脂肪酶简介 | 第17页 |
| 1.5 脂肪酶催化过氧水解的反应机理 | 第17-18页 |
| 1.6 .研究的意义及主要内容 | 第18-21页 |
| 1.6.1 研究的意义 | 第18-19页 |
| 1.6.2 研究的主要内容 | 第19-21页 |
| 第二章 脂肪酶PCL的生物信息学分析 | 第21-26页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.3.1 序列分析 | 第21页 |
| 2.3.2 同源建模 | 第21页 |
| 2.3.3 分子对接 | 第21-22页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第22-25页 |
| 2.4.1 多序列比对分析 | 第22-23页 |
| 2.4.2 脂肪酶PCL结构中H_2O_2结合位点的分析 | 第23-25页 |
| 2.5 本章小结 | 第25-26页 |
| 第三章 脂肪酶PCL催化口袋中与H_2O_2结合的重要位点的研究 | 第26-38页 |
| 3.1 引言 | 第26页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第26-29页 |
| 3.2.1 菌株 | 第26页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第26页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第26-27页 |
| 3.2.4 溶液配制 | 第27-29页 |
| 3.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 3.3.1 脂肪酶PCL突变体引物的设计 | 第29页 |
| 3.3.2 脂肪酶PCL突变体的构建 | 第29-30页 |
| 3.3.3 脂肪酶PCL突变体的表达 | 第30-31页 |
| 3.3.4 脂肪酶PCL及其突变体的发酵及蛋白纯化 | 第31-32页 |
| 3.3.5 蛋白浓度的测定 | 第32页 |
| 3.3.6 脂肪酶PCL及其突变体酶活力和耐受H_2O_2能力的测定 | 第32-33页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第33-36页 |
| 3.4.1 突变体Y21F、H144W的构建及表达 | 第33-34页 |
| 3.4.2 脂肪酶PCL及突变体Y21F、H144W的蛋白纯化 | 第34-35页 |
| 3.4.3 脂肪酶PCL及突变体Y21F、H144W酶活力和耐受H_2O_2能力的比较 | 第35-36页 |
| 3.5 本章小结 | 第36-38页 |
| 第四章 脂肪酶PCL耐受H_2O_2突变体的构建及分子机制 | 第38-52页 |
| 4.1 引言 | 第38页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第38页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第38页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第38页 |
| 4.2.3 溶液配制 | 第38页 |
| 4.3 实验方法 | 第38-40页 |
| 4.3.1 脂肪酶PCL突变体的构建及纯化 | 第38-39页 |
| 4.3.2 脂肪酶PCL及其突变体耐受H_2O_2能力的测定 | 第39页 |
| 4.3.3 脂肪酶PCL及其突变体最适反应温度及pH的测定 | 第39页 |
| 4.3.4 脂肪酶PCL及其突变体有机酸链长选择性的测定 | 第39页 |
| 4.3.5 脂肪酶PCL及其突变体动力学参数的测定 | 第39页 |
| 4.3.6 脂肪酶PCL及其突变体热稳定性的测定 | 第39-40页 |
| 4.3.7 脂肪酶PCL及其突变体熔解温度的测定 | 第40页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第40-50页 |
| 4.4.1 提高耐受H_2O_2能力的突变位点的选取 | 第40-41页 |
| 4.4.2 突变体的克隆表达及纯化 | 第41-42页 |
| 4.4.3 脂肪酶PCL及其突变体耐受H_2O_2能力的评估 | 第42-44页 |
| 4.4.4 突变体的最适pH及温度 | 第44-45页 |
| 4.4.5 突变体的有机酸链长选择性 | 第45-46页 |
| 4.4.6 突变体的动力学参数 | 第46-47页 |
| 4.4.7 突变体的热稳定性及结构稳定性 | 第47-50页 |
| 4.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第五章 高H_2O_2耐受性突变体PCL-I260R催化环氧化反应的研究 | 第52-59页 |
| 5.1 引言 | 第52页 |
| 5.2 试剂与仪器 | 第52页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第52页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第52页 |
| 5.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 5.3.1 H_2O_2浓度对脂肪酶介导环氧化反应效率的影响 | 第52-53页 |
| 5.3.2 高H_2O_2耐受性突变体PCL-I260R在无溶剂体系下介导烯烃的环氧化反应 | 第53页 |
| 5.3.3 气相色谱检测 | 第53页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第53-57页 |
| 5.4.1 H_2O_2浓度对脂肪酶介导环氧化反应效率影响的研究 | 第53-55页 |
| 5.4.2 高H_2O_2耐受性突变体PCL-I260R在无溶剂体系下催化环氧化反应 | 第55-57页 |
| 5.5 本章小结 | 第57-59页 |
| 结论与展望 | 第59-62页 |
| 1.结论 | 第59-60页 |
| 2.创新点 | 第60-61页 |
| 3.展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第70页 |
