| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第10-33页 |
| 1.1 泛素化修饰系统 | 第10-15页 |
| 1.1.1 泛素化修饰简介 | 第10页 |
| 1.1.2 泛素化修饰的组成成分 | 第10-12页 |
| 1.1.3 泛素化修饰的作用机理 | 第12-13页 |
| 1.1.4 泛素化修饰的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1.5 泛素化修饰中的 RING 结构域泛素连接酶 | 第14-15页 |
| 1.2 TRIM 家族蛋白 | 第15-27页 |
| 1.2.1 TRIM 家族蛋白简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 TRIM 家族蛋白的分类及结构特点 | 第16-22页 |
| 1.2.3 TRIM 家族蛋白的功能 | 第22-27页 |
| 1.3 TRIM 家族蛋白作为一种 RING 结构域的泛素连接酶 | 第27-32页 |
| 1.3.1 TRIM 家族蛋白参与到泛素化修饰 | 第27页 |
| 1.3.2 具有泛素连接酶活性的 TRIM 家族蛋白 | 第27-32页 |
| 1.4 本研究的意义与技术路线 | 第32-33页 |
| 第2章 材料与方法 | 第33-54页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第33-42页 |
| 2.2.1 表达载体、菌株及克隆 | 第33-38页 |
| 2.2.2 试剂与抗体 | 第38页 |
| 2.2.3 仪器与耗材 | 第38-39页 |
| 2.2.4 常用缓冲液与培养基 | 第39-42页 |
| 2.3 实验方法 | 第42-54页 |
| 2.3.1 表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第43-46页 |
| 2.3.3 蛋白的晶体培养、优化及解析 | 第46-50页 |
| 2.3.4 蛋白质聚合状态的研究 | 第50-51页 |
| 2.3.5 体外泛素化实验 | 第51-52页 |
| 2.3.6 体内泛素化实验 | 第52页 |
| 2.3.7 免疫印迹及免疫共沉淀 | 第52-54页 |
| 第3章 TRIM 家族蛋白的表达、纯化与结晶 | 第54-69页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 重组蛋白的表达纯化与结晶 | 第54-68页 |
| 3.2.1 TRIM 家族成员全长蛋白的表达纯化及结晶 | 第54-57页 |
| 3.2.2 TRIM 家族成员截短体的纯化与结晶 | 第57-60页 |
| 3.2.3 TRIM69 截短体与 MAGE 蛋白形成复合物的纯化与结晶 | 第60-61页 |
| 3.2.4 TRIM69 CCD 的纯化与结晶 | 第61-65页 |
| 3.2.5 TRIM25 突变体及其截短体的表达与纯化 | 第65-66页 |
| 3.2.6 TRIM25 异源二聚体的表达与纯化 | 第66-67页 |
| 3.2.7 其他 TRIM 家族成员截短体的表达与纯化 | 第67-68页 |
| 3.3 本章小结与讨论 | 第68-69页 |
| 第4章 TRIM69 CCD 结构的解析及分析 | 第69-78页 |
| 4.1 引言 | 第69页 |
| 4.2 TRIM69 CCD 结构的解析 | 第69-72页 |
| 4.3 TRIM69 CCD 的结构及其分析 | 第72-77页 |
| 4.3.1 TRIM69 CCD 的结构 | 第72-74页 |
| 4.3.2 TRIM69 CCD 结构分析与全长蛋白的模型建立 | 第74-77页 |
| 4.4 本章小结与讨论 | 第77-78页 |
| 第5章 TRIM69 全长模型的验证 | 第78-95页 |
| 5.1 引言 | 第78页 |
| 5.2 CCD 介导 TRIM 家族蛋白形成反向平行的二聚体具有保守性 | 第78-85页 |
| 5.2.1 CCD 可以介导 TRIM 家族成员二聚化 | 第78-79页 |
| 5.2.2 CCD 介导 TRIM 家族蛋白形成同源寡聚体或者异源寡聚体 | 第79-80页 |
| 5.2.3 TRIM25 可能形成反向平行的二体结构 | 第80-85页 |
| 5.3 TRIM 家族成员发挥泛素连接酶活性的机制研究 | 第85-90页 |
| 5.3.1 TRIM25 对于底物的泛素化需要反向平行的二聚体模式 | 第86-88页 |
| 5.3.2 两个活性区域可能以协同方式参与泛素化 | 第88-90页 |
| 5.4 TRIM25 活性区域的研究 | 第90-93页 |
| 5.4.1 TRIM25 的 B-box 会影响 TRIM25 的泛素连接酶活性 | 第90-91页 |
| 5.4.2 N 端的 EE 氨基酸残基影响 TRIM 蛋白的泛素连接酶活性 | 第91-93页 |
| 5.5 本章小结与讨论 | 第93-95页 |
| 第6章 总结与展望 | 第95-100页 |
| 6.1 工作总结 | 第95-96页 |
| 6.2 工作讨论与展望 | 第96-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第110页 |
