| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 赤霉素和脱落酸的分子研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 赤霉素的分子作用机理研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.2 脱落酸的分子作用机理研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 NCED基因研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 植物开花调控相关基因研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 光周期途径 | 第18页 |
| 1.3.2 春化途径 | 第18-19页 |
| 1.3.3 自主途径 | 第19页 |
| 1.3.4 赤霉素途径 | 第19-20页 |
| 1.4 FT基因研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4.1 FT基因概述 | 第20页 |
| 1.4.2 FT基因的作用模式 | 第20-21页 |
| 1.4.3 FT基因在主要开花途径中的作用 | 第21页 |
| 2 NCED4基因克隆及序列分析 | 第21-29页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21-22页 |
| 2.1.2 酶和生化试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 引物 | 第22页 |
| 2.1.5 培养液及培养基 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 拟南芥基组DNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 NCED4基因扩增 | 第23页 |
| 2.2.3 PCR产切胶回收 | 第23-24页 |
| 2.2.4 回收NCED4片段的连接和转化 | 第24页 |
| 2.2.5 单克隆菌体挑收及筛选 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 拟南芥基因组DNA提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 NCED4构隆 | 第25-26页 |
| 2.3.3 NCED4基因生物信息学分析 | 第26-28页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第28-29页 |
| 3 NCED4表达载体的构建及转化 | 第29-34页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第29-30页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 3.1.2 酶和生化试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 试验仪器 | 第29页 |
| 3.1.4 引物 | 第29页 |
| 3.1.5 培养液及培养基 | 第29-30页 |
| 3.2 载体的构建和转化 | 第30-31页 |
| 3.2.1 克隆载体构建 | 第30页 |
| 3.2.2 重组子酶切及回收 | 第30页 |
| 3.2.3 pBI-NCED4表达载体的构建 | 第30页 |
| 3.2.4 农杆菌感受态的制备 | 第30-31页 |
| 3.2.5 农杆菌转化及其鉴定 | 第31页 |
| 3.2.6 花器官农杆菌浸泡法转化拟南芥 | 第31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-34页 |
| 3.3.1 克隆载体构建 | 第31-32页 |
| 3.3.2 pBI-NCED4表达载体的构建及检测 | 第32-33页 |
| 3.3.3 pBI-NCED4农杆菌转化 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第34页 |
| 4 MsFTa基因克隆及序列分析 | 第34-41页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第34-35页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 4.1.2 酶和生化试剂 | 第34页 |
| 4.1.3 试验仪器 | 第34页 |
| 4.1.4 引物 | 第34-35页 |
| 4.2 方法 | 第35-37页 |
| 4.2.1 紫花苜蓿基因组DNA提取 | 第35页 |
| 4.2.2 紫花苜蓿RNA提取 | 第35页 |
| 4.2.3 3'-RACE-Ready cDNA合成 | 第35-36页 |
| 4.2.4 MsFTa基臻因3'-RACE PCR扩增 | 第36页 |
| 4.2.5 PCI产物切胶回收 | 第36页 |
| 4.2.6 克隆载体构建 | 第36-37页 |
| 4.3 结果与分析 | 第37-40页 |
| 4.3.1 紫花苜蓿总RNA提取 | 第37页 |
| 4.3.2 MsFTa基因3'RACE PCR | 第37-38页 |
| 4.3.3 MsFTa基因生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 4.3.4 MsFTa蛋白序列分析 | 第39-40页 |
| 4.4 讨论 | 第40-41页 |
| 5 pBI-MsFTa超表达载体构建 | 第41-44页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第41页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第41页 |
| 5.1.2 酶和生化试剂 | 第41页 |
| 5.1.3 试验仪器 | 第41页 |
| 5.1.4 引物 | 第41页 |
| 5.2 方法 | 第41-42页 |
| 5.2.1 MsFTa克隆载体构建 | 第41-42页 |
| 5.2.2 pBI-MsFTa表达载体的构建 | 第42页 |
| 5.2.3 农杆菌感受态的制备 | 第42页 |
| 5.2.4 农杆菌转化及其鉴定 | 第42页 |
| 5.2.5 花器官农杆菌浸泡法转化拟南芥 | 第42页 |
| 5.3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 5.3.1 克降载体的构建 | 第42-43页 |
| 5.3.2 pBI-NCED4表达载体的构建 | 第43页 |
| 5.3.3 农杆菌转化鉴定 | 第43-44页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第44页 |
| 6 再生植株鉴定及基因功能分析 | 第44-48页 |
| 6.1 材料 | 第44-45页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第44-45页 |
| 6.1.2 生化试剂 | 第45页 |
| 6.2 方法 | 第45页 |
| 6.2.1 基因组DNA提取 | 第45页 |
| 6.2.2 再生植株PCR检测 | 第45页 |
| 6.2.3 转基因植株开花时间统计 | 第45页 |
| 6.3 结果与分析 | 第45-48页 |
| 6.3.1 拟南芥再生植株PCR检测 | 第45-46页 |
| 6.3.2 转基因拟南芥的RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| 6.3.3 MsFTa基因推迟转基因植物开花 | 第47-48页 |
| 6.4 讨论及小结 | 第48页 |
| 7 表达分析 | 第48-54页 |
| 7.1 材料 | 第48-49页 |
| 7.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 7.1.2 试验试剂 | 第48页 |
| 7.1.3 试验仪器 | 第48-49页 |
| 7.2 方法 | 第49-50页 |
| 7.2.1 引物设计 | 第49页 |
| 7.2.2 材料处理 | 第49页 |
| 7.2.3 荧光定量RT-PCR检测 | 第49-50页 |
| 7.3 结果与分析 | 第50-53页 |
| 7.3.1 NCED4组织差异性 | 第50页 |
| 7.3.2 外源激素处理对NCED4表达量的影响 | 第50-51页 |
| 7.3.3 MsFTa基因组织差异性 | 第51-52页 |
| 7.3.4 MsFTa基因受GA_3诱导 | 第52页 |
| 7.3.5 MsFTa基因受冷条件诱导 | 第52-53页 |
| 7.4 讨论及小结 | 第53-54页 |
| 8 全文结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
