| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 课题来源及研究的目的和意义 | 第9页 |
| 1.1.1 课题的来源 | 第9页 |
| 1.1.2 课题研究的背景和意义 | 第9页 |
| 1.2 MARVELD1 的研究进展 | 第9-13页 |
| 1.2.1 MARVEL 蛋白家族相关研究 | 第10-11页 |
| 1.2.2 MARVELD1 的研究现状 | 第11-13页 |
| 1.3 miRNA 研究进展 | 第13-17页 |
| 1.3.1 miRNA 的特征 | 第13-14页 |
| 1.3.2 miRNA 的生物合成与加工机制 | 第14-15页 |
| 1.3.3 miRNA 的功能研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.4 内含子 miRNA 研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 肺癌研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 肺癌基本现状 | 第17-18页 |
| 1.4.2 肺癌与 miRNA | 第18-19页 |
| 1.5 本文的主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第21页 |
| 2.1.2 载体及重组体 | 第21页 |
| 2.1.3 实验试剂与配制方法 | 第21-25页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.5 分析软件 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第27-37页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实时定量逆转录 PCR | 第28-31页 |
| 2.2.3 免疫印迹实验检测蛋白表达 | 第31-33页 |
| 2.2.4 染色质免疫共沉淀实验 | 第33-34页 |
| 2.2.5 预测靶基因 3'UTR-pMIR 质粒的构建 | 第34-36页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告系统检测实验 | 第36-37页 |
| 2.3 本章小结 | 第37-38页 |
| 第3章 MARVELD1 调控 hsa-miR-186 和 hsa-miR-335 的表达 | 第38-47页 |
| 3.1 肺癌细胞 hsa-miR-186 和 hsa-miR-335 与 MARVELD1 的表达 | 第38-41页 |
| 3.1.1 肺癌细胞培养与 RNA 的提取 | 第38页 |
| 3.1.2 肺癌细胞中 hsa-miR-186 与 MARVELD1 的表达关系 | 第38-40页 |
| 3.1.3 肺癌细胞中 hsa-miR-335 与 MARVELD1 的表达关系 | 第40-41页 |
| 3.2 转染 MARVELD1 重组质粒后对 hsa-miR-186 和 hsa-miR-335 表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.2.1 转染细胞 MARVELD1 蛋白表达分析 | 第41-42页 |
| 3.2.2 MARVELD1 过表达对 hsa-miR-186 表达的影响 | 第42页 |
| 3.2.3 过表达 MARVELD1 后 hsa-miR-335 的表达 | 第42-43页 |
| 3.3 下调 MARVELD1 后影响 hsa-miR-186 和 hsa-miR-335 表达 | 第43-45页 |
| 3.3.1 shRNA 干扰 MARVELD1 的表达效率分析 | 第43-44页 |
| 3.3.2 干扰 MARVELD1 表达后对 hsa-miR-186 表达的影响 | 第44页 |
| 3.3.3 干扰 MARVELD1 表达后对 hsa-miR-335 表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第4章 MARVELD1 调控 hsa-miR-186 和 hsa-miR-335 表达的机制 | 第47-56页 |
| 4.1 hsa-miR-186 和 hsa-miR-335 的定位分析 | 第47页 |
| 4.2 MARVELD1 调控宿主基因的表达 | 第47-50页 |
| 4.2.1 MARVELD1 过表达对宿主基因表达的影响 | 第48-49页 |
| 4.2.2 干扰 MARVELD 表达之后对宿主基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 4.3 MARVELD1 影响宿主基因启动子的活性 | 第50-54页 |
| 4.3.1 宿主基因启动子引物和超声条件的确认 | 第51-52页 |
| 4.3.2 组蛋白 H4K20 me1 与宿主基因启动子 DNA 的关系 | 第52-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 4.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第5章 hsa-miR-186 与 hsa-miR-335 靶基因初步分析 | 第56-60页 |
| 5.1 靶基因的预测及其 3' UTR-pMIR 重组质粒的构建 | 第56-57页 |
| 5.1.1 hsa-miR-186 和 has-miR-335 的靶基因的预测 | 第56-57页 |
| 5.1.2 预测靶基因 3' UTR-pMIR 重组质粒的构建 | 第57页 |
| 5.2 hsa-miR-186 和 hsa-miR-335 靶基因的确认 | 第57-59页 |
| 5.3 讨论 | 第59页 |
| 5.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
