| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 骨骼肌生长发育概述 | 第12-19页 |
| 1.1.1 参与骨骼肌发育的重要调节因子 | 第13-16页 |
| 1.1.1.1 MRFs家族因子 | 第13-14页 |
| 1.1.1.2 MEFs家族因子 | 第14-15页 |
| 1.1.1.3 Pax家族因子 | 第15-16页 |
| 1.1.1.4 其它成肌调节因子 | 第16页 |
| 1.1.2 参与骨骼肌发育的非编码RNA | 第16-19页 |
| 1.1.2.1 MicroRNAs | 第17-18页 |
| 1.1.2.2 LncRNAs | 第18-19页 |
| 1.2 环状RNA研究进展概述 | 第19-24页 |
| 1.2.1 环状RNA的分类 | 第19-20页 |
| 1.2.2 环状RNA的形成机制 | 第20-21页 |
| 1.2.3 环状RNA的功能与作用机制 | 第21-23页 |
| 1.2.3.1 环状RNA充当miRNA的分子“海绵” | 第22页 |
| 1.2.3.2 环状RNA调节基因转录 | 第22页 |
| 1.2.3.3 环状RNA与RNA结合蛋白相互作用 | 第22页 |
| 1.2.3.4 环状RNA的蛋白质翻译功能 | 第22-23页 |
| 1.2.4 环状RNA在骨骼肌发育过程中的作用 | 第23-24页 |
| 1.3 研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第25-36页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验细胞系 | 第25页 |
| 2.1.2 实验菌株 | 第25页 |
| 2.1.3 实验主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.1.4 实验试剂耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.4.1 实验主要试剂耗材 | 第26页 |
| 2.1.4.2 实验试剂的配置 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 细胞复苏 | 第27页 |
| 2.2.1.2 细胞传代 | 第27页 |
| 2.2.1.3 细胞冻存 | 第27-28页 |
| 2.2.1.4 细胞分化 | 第28页 |
| 2.2.2 RNA提取和cDNA合成 | 第28-29页 |
| 2.2.2.1 RNA提取 | 第28页 |
| 2.2.2.2 环状RNA富集 | 第28-29页 |
| 2.2.2.3 cDNA合成 | 第29页 |
| 2.2.3 CircRNAs高通量测序 | 第29-31页 |
| 2.2.3.1 CircRNAs测序文库构建及测序 | 第29-30页 |
| 2.2.3.2 CircRNAs测序数据分析 | 第30-31页 |
| 2.2.4 荧光定量PCR体系及程序 | 第31-32页 |
| 2.2.5 环状RNA克隆及载体构建 | 第32-34页 |
| 2.2.5.1 引物设计 | 第32-33页 |
| 2.2.5.2 PCR扩增、检测及纯化回收 | 第33页 |
| 2.2.5.3 TA克隆及测序 | 第33-34页 |
| 2.2.5.4 阳性单克隆扩大培养及质粒提取 | 第34页 |
| 2.2.6 环状RNA荧光原位杂交(FISH) | 第34-36页 |
| 第3章 结果分析与讨论 | 第36-52页 |
| 3.1 环状RNA高通量测序与分析 | 第36-46页 |
| 3.1.1 C2C12细胞不同分化时期总RNA提取与质检结果 | 第36-37页 |
| 3.1.2 环状RNA测序数据初步分析 | 第37-39页 |
| 3.1.4 环状RNA特征分析 | 第39-40页 |
| 3.1.5 成肌细胞环状RNA表达分析 | 第40-43页 |
| 3.1.6 环状RNA与microRNA相互作用分析 | 第43-46页 |
| 3.2 环状RNA的鉴定及表达量的验证 | 第46-49页 |
| 3.2.1 环状RNAjunction区验证 | 第46-47页 |
| 3.2.2 环状RNA的表达量验证 | 第47页 |
| 3.2.3 环状RNA全序列扩增 | 第47-48页 |
| 3.2.4 环状RNA的亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 3.3 讨论 | 第49-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 攻读学位期间获得与学位论文相关的科研成果目录 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-81页 |
