| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 梨小食心虫的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 梨小食心虫的分布、危害及发生规律 | 第12-13页 |
| 1.1.2 梨小食心虫的生长发育研究进展 | 第13页 |
| 1.1.3 梨小食心虫的防治现状 | 第13-15页 |
| 1.2 Bt的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 Bt杀虫晶体蛋白的分类及命名 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Bt杀虫晶体蛋白的结构与功能 | 第16-17页 |
| 1.2.3 Bt毒素的杀虫机理 | 第17-18页 |
| 1.3 昆虫中肠Bt受体的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.3.1 Bt受体的种类 | 第18页 |
| 1.3.2 碱性磷酸酯酶(AlkalinePhosphatase,ALP) | 第18-19页 |
| 1.3.3 钙粘蛋白(Cadherin-likeprotein,CAD) | 第19页 |
| 1.3.4 氨肽酶N(AminopeptidaseN,APN) | 第19-22页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基及试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.2 梨小食心虫中肠GmolAPN3基因全长的克隆 | 第26-35页 |
| 2.2.1 梨小食心虫中肠组织的收集 | 第26页 |
| 2.2.2 梨小食心虫中肠RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.4 5'RACE和3'RACEcDNA模板的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.5 PCR引物的设计 | 第28-29页 |
| 2.2.6 PCR反应体系和程序 | 第29-32页 |
| 2.2.7 PCR产物回收与纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.8 连接反应 | 第33页 |
| 2.2.9 转化 | 第33-34页 |
| 2.2.10 阳性克隆的鉴定 | 第34页 |
| 2.2.11 序列分析 | 第34-35页 |
| 2.3 梨小食心虫GmolAPN3蛋白的分段原核表达 | 第35-38页 |
| 2.3.1 梨小食心虫中肠组织的收集、RNA的提取以及cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| 2.3.2 GmolAPN3基因片段引物的设计 | 第35-36页 |
| 2.3.3 GmolAPN3基因的分段克隆 | 第36页 |
| 2.3.4 PCR产物回收与纯化、连接反应、转化及阳性克隆鉴定 | 第36页 |
| 2.3.5 表达载体和克隆片段的双酶切 | 第36-37页 |
| 2.3.6 目的片段与表达载体的连接 | 第37页 |
| 2.3.7 转化感受态细胞Rosetta(DE) | 第37页 |
| 2.3.8 蛋白的原核表达 | 第37页 |
| 2.3.9 蛋白纯化与透析 | 第37-38页 |
| 2.4 梨小食心虫不同发育阶段、幼虫不同组织GmolAPN3基因表达量检测 | 第38-41页 |
| 2.4.1 梨小食心虫不同发育阶段、幼虫不同组织样品的收集 | 第38页 |
| 2.4.2 RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.4.3 cDNA第一链的合成 | 第39页 |
| 2.4.4 实时荧光定量PCR(Quantitativereal-timePCR,qRT-PCR)引物的设计 | 第39-40页 |
| 2.4.5 qRT-PCR引物特异性和扩增效率检测 | 第40页 |
| 2.4.6 qRT-PCR反应 | 第40页 |
| 2.4.7 数据分析 | 第40-41页 |
| 2.5 不同浓度Cry1Ac毒素对GmolAPN3基因表达量的影响 | 第41页 |
| 2.5.1 Cry1Ac毒素对梨小食心虫的毒力测定 | 第41页 |
| 2.5.2 收集取食不同浓度的Cry1Ac毒素梨小食心虫样品 | 第41页 |
| 2.5.3 RNA的提取 | 第41页 |
| 2.5.4 cDNA第一链的合成 | 第41页 |
| 2.5.5 qRT-PCR反应 | 第41页 |
| 2.5.6 数据分析 | 第41页 |
| 2.6 梨小食心虫GmolAPN3功能验证 | 第41-44页 |
| 2.6.1 梨小食心虫中肠组织的收集、RNA的提取以及cDNA第一链的合成 | 第41页 |
| 2.6.2 PCR引物的设计 | 第41-42页 |
| 2.6.3 PCR反应体系和程序 | 第42页 |
| 2.6.4 PCR产物回收与纯化、连接反应、转化及阳性克隆鉴定 | 第42页 |
| 2.6.5 dsRNA的合成与纯化 | 第42-43页 |
| 2.6.6 dsRNA浓度的筛选 | 第43页 |
| 2.6.7 干扰后效果的检测 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-56页 |
| 3.1 梨小食心虫中肠RNA的提取 | 第44-45页 |
| 3.2 梨小食心虫GmolAPN3基因的序列分析 | 第45-46页 |
| 3.3 梨小食心虫GmolAPN3蛋白结构域及三维结构模型分析 | 第46-48页 |
| 3.4 系统发育分析 | 第48-49页 |
| 3.5 梨小食心虫GmolAPN3蛋白的分段原核表达 | 第49-50页 |
| 3.6 qRT-PCR引物特异性和扩增效率检测 | 第50-51页 |
| 3.7 梨小食心虫不同发育阶段GmolAPN3基因的表达量分析 | 第51-52页 |
| 3.8 梨小食心虫幼虫不同组织中GmolAPN3基因的表达量分析 | 第52页 |
| 3.9 Cry1Ac毒素对梨小食心虫的毒力测定 | 第52-53页 |
| 3.10 不同浓度Cry1Ac毒素对GmolAPN3基因表达量的影响 | 第53-54页 |
| 3.11 梨小食心虫GmolAPN3功能验证 | 第54-56页 |
| 3.11.1 dsRNA的合成与纯化 | 第54页 |
| 3.11.2 dsRNA浓度筛选结果 | 第54-55页 |
| 3.11.3 干扰后效果 | 第55-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 梨小食心虫GmolAPN3基因的结构特点 | 第56页 |
| 4.2 梨小食心虫不同发育阶段、幼虫不同组织GmolAPN3基因的表达量分析 | 第56-57页 |
| 4.3 不同浓度Cry1Ac毒素对GmolAPN3基因表达量的影响分析 | 第57-58页 |
| 4.4 梨小食心虫GmolAPN3功能验证 | 第58-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
