符号说明 | 第5-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
1 引言 | 第12-22页 |
1.1 铅毒性研究进展 | 第12-15页 |
1.1.1 铅污染情况 | 第12-14页 |
1.1.2 铅毒性作用研究 | 第14-15页 |
1.2 细胞凋亡研究进展 | 第15-19页 |
1.2.1 细胞凋亡概况 | 第15-16页 |
1.2.2 细胞凋亡通路 | 第16-19页 |
1.3 线粒体膜通透性转换孔(MPTP)与细胞凋亡 | 第19-22页 |
2 材料与方法 | 第22-36页 |
2.1 试验材料 | 第22-24页 |
2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
2.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
2.2 相关溶液的配制 | 第24-27页 |
2.2.1 平衡盐溶液 PBS 配制 | 第24页 |
2.2.2 酸液配方 | 第24页 |
2.2.3 血清处理 | 第24-25页 |
2.2.4 DMEM-F12 培养基配制与除菌 | 第25页 |
2.2.5 硝酸铅毒液配制 | 第25页 |
2.2.6 Calcein-AM 和 CoCl26H2O 配制 | 第25页 |
2.2.7 环孢菌素 A(CsA)母液配制 | 第25页 |
2.2.8 DIDS 母液配制 | 第25页 |
2.2.9 BA 母液配制 | 第25页 |
2.2.10 10×蛋白电泳缓冲液配制 | 第25-26页 |
2.2.11 10×蛋白电转缓冲液配制 | 第26页 |
2.2.12 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液(Acr/Bis)配制 | 第26页 |
2.2.13 10%SDS 溶液配制 | 第26页 |
2.2.14 10%过硫酸铵(APS)溶液配制 | 第26页 |
2.2.15 10×TBS 溶液配制 | 第26页 |
2.2.16 1×TBST 工作液配制 | 第26页 |
2.2.17 5%封闭缓冲液配制 | 第26页 |
2.2.18 鼠尾胶原制备 | 第26-27页 |
2.2.19 HCl 和 NaOH 溶液配制 | 第27页 |
2.3 试验方法 | 第27-36页 |
2.3.1 SD 大鼠肾小管上皮细胞原代培养及传代 | 第27页 |
2.3.2 试验分组 | 第27页 |
2.3.3 透射电镜样品制备及观察 | 第27-28页 |
2.3.4 激光共聚焦显微镜样品制备及采集图像 | 第28页 |
2.3.5 流式细胞仪检测的样品制备及测定 | 第28-29页 |
2.3.6 荧光定量 PCR 样品制备及测定 | 第29-32页 |
2.3.7 western blot 样品制备、电泳及显影 | 第32-35页 |
2.3.8 统计学分析 | 第35-36页 |
3 结果与分析 | 第36-53页 |
3.1 透射电子显微镜观察线粒体形态学变化 | 第36-37页 |
3.2 激光共聚焦显微镜检测线粒体膜通透性转换孔(MPTP)开放 | 第37-38页 |
3.3 铅染毒及添加 CsA 对细胞凋亡率的影响 | 第38-40页 |
3.4 Cyp-D 蛋白及 mRNA 表达水平变化 | 第40-42页 |
3.4.1 Cyp-D 蛋白表达水平变化 | 第40-41页 |
3.4.2 Cyp-D /Ppif mRNA 表达水平变化 | 第41-42页 |
3.5 铅染毒及添加 DIDS 对细胞凋亡率的影响 | 第42-43页 |
3.6 VDAC- 1、VDAC-2 和 VDAC-3 蛋白及 mRNA 表达水平变化 | 第43-48页 |
3.6.1 VDAC- 1 、VDAC-2 和 VDAC-3 蛋白表达水平变化 | 第43-45页 |
3.6.2 VDAC- 1 、VDAC-2 和 VDAC-3 mRNA 表达水平变化 | 第45-48页 |
3.7 铅染毒及添加 BA 对细胞凋亡率的影响 | 第48-49页 |
3.8 ANT- 1 和 ANT-2 蛋白及 mRNA 表达水平变化 | 第49-53页 |
3.8.1 ANT- 1 和 ANT-2 蛋白表达水平变化 | 第49-51页 |
3.8.2 ANT-1 和 ANT-2 mRNA 表达水平变化 | 第51-53页 |
4 讨论 | 第53-58页 |
4.1 线粒体与细胞凋亡 | 第53-54页 |
4.2 线粒体膜通透性转换孔(MPTP)与细胞凋亡 | 第54页 |
4.3 Cyp-D 在铅诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用 | 第54-55页 |
4.4 VDAC 在铅诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用 | 第55-56页 |
4.5 ANT 在铅诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用 | 第56-58页 |
5 结论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-77页 |
致谢 | 第77页 |