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线粒体膜通透性转换在铅诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用

符号说明第5-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 引言第12-22页
    1.1 铅毒性研究进展第12-15页
        1.1.1 铅污染情况第12-14页
        1.1.2 铅毒性作用研究第14-15页
    1.2 细胞凋亡研究进展第15-19页
        1.2.1 细胞凋亡概况第15-16页
        1.2.2 细胞凋亡通路第16-19页
    1.3 线粒体膜通透性转换孔(MPTP)与细胞凋亡第19-22页
2 材料与方法第22-36页
    2.1 试验材料第22-24页
        2.1.2 主要试剂第22-23页
        2.1.3 主要仪器第23-24页
    2.2 相关溶液的配制第24-27页
        2.2.1 平衡盐溶液 PBS 配制第24页
        2.2.2 酸液配方第24页
        2.2.3 血清处理第24-25页
        2.2.4 DMEM-F12 培养基配制与除菌第25页
        2.2.5 硝酸铅毒液配制第25页
        2.2.6 Calcein-AM 和 CoCl26H2O 配制第25页
        2.2.7 环孢菌素 A(CsA)母液配制第25页
        2.2.8 DIDS 母液配制第25页
        2.2.9 BA 母液配制第25页
        2.2.10 10×蛋白电泳缓冲液配制第25-26页
        2.2.11 10×蛋白电转缓冲液配制第26页
        2.2.12 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液(Acr/Bis)配制第26页
        2.2.13 10%SDS 溶液配制第26页
        2.2.14 10%过硫酸铵(APS)溶液配制第26页
        2.2.15 10×TBS 溶液配制第26页
        2.2.16 1×TBST 工作液配制第26页
        2.2.17 5%封闭缓冲液配制第26页
        2.2.18 鼠尾胶原制备第26-27页
        2.2.19 HCl 和 NaOH 溶液配制第27页
    2.3 试验方法第27-36页
        2.3.1 SD 大鼠肾小管上皮细胞原代培养及传代第27页
        2.3.2 试验分组第27页
        2.3.3 透射电镜样品制备及观察第27-28页
        2.3.4 激光共聚焦显微镜样品制备及采集图像第28页
        2.3.5 流式细胞仪检测的样品制备及测定第28-29页
        2.3.6 荧光定量 PCR 样品制备及测定第29-32页
        2.3.7 western blot 样品制备、电泳及显影第32-35页
        2.3.8 统计学分析第35-36页
3 结果与分析第36-53页
    3.1 透射电子显微镜观察线粒体形态学变化第36-37页
    3.2 激光共聚焦显微镜检测线粒体膜通透性转换孔(MPTP)开放第37-38页
    3.3 铅染毒及添加 CsA 对细胞凋亡率的影响第38-40页
    3.4 Cyp-D 蛋白及 mRNA 表达水平变化第40-42页
        3.4.1 Cyp-D 蛋白表达水平变化第40-41页
        3.4.2 Cyp-D /Ppif mRNA 表达水平变化第41-42页
    3.5 铅染毒及添加 DIDS 对细胞凋亡率的影响第42-43页
    3.6 VDAC- 1、VDAC-2 和 VDAC-3 蛋白及 mRNA 表达水平变化第43-48页
        3.6.1 VDAC- 1 、VDAC-2 和 VDAC-3 蛋白表达水平变化第43-45页
        3.6.2 VDAC- 1 、VDAC-2 和 VDAC-3 mRNA 表达水平变化第45-48页
    3.7 铅染毒及添加 BA 对细胞凋亡率的影响第48-49页
    3.8 ANT- 1 和 ANT-2 蛋白及 mRNA 表达水平变化第49-53页
        3.8.1 ANT- 1 和 ANT-2 蛋白表达水平变化第49-51页
        3.8.2 ANT-1 和 ANT-2 mRNA 表达水平变化第51-53页
4 讨论第53-58页
    4.1 线粒体与细胞凋亡第53-54页
    4.2 线粒体膜通透性转换孔(MPTP)与细胞凋亡第54页
    4.3 Cyp-D 在铅诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用第54-55页
    4.4 VDAC 在铅诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用第55-56页
    4.5 ANT 在铅诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用第56-58页
5 结论第58-59页
参考文献第59-77页
致谢第77页

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