| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 第1章 文献综述 | 第7-17页 |
| 1.1 喜树概况 | 第7-10页 |
| 1.2 喜树碱的作用机制 | 第10-11页 |
| 1.3 喜树碱及其衍生物的研究概况 | 第11-12页 |
| 1.4 植物转基因技术 | 第12-15页 |
| 1.4.1 植物转基因技术的研究与应用 | 第12-13页 |
| 1.4.2 农杆菌介导的遗传转化原理 | 第13-14页 |
| 1.4.3 转基因植株的检测方法 | 第14页 |
| 1.4.4 植物表达载体pBI121 | 第14-15页 |
| 1.5 植物组织培养 | 第15-16页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂及试剂盒 | 第17页 |
| 2.1.3 质粒与菌株 | 第17-18页 |
| 2.1.4 引物的设计及合成 | 第18页 |
| 2.1.5 实验所需常用溶液、试剂及培养基的配制 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-42页 |
| 2.2.1 质粒(pBI190)的构建 | 第18-24页 |
| 2.2.2 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.3 连接产物转化大肠杆菌DH5α及筛选与鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.4 质粒(pBI190)DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.5 表达载体(pBI190-1575)的构建(1575 bp插入pBI190) | 第28-32页 |
| 2.2.6 烟草无菌苗的培养 | 第32-33页 |
| 2.2.7 根瘤农杆菌EHA105感受态的制备 | 第33页 |
| 2.2.8 根瘤农杆菌介导的喜树sls-like基因向烟草中的转化 | 第33-35页 |
| 2.2.9 转基因再生植株的检测 | 第35-37页 |
| 2.2.10 菌液总蛋白质的提取 | 第37页 |
| 2.2.11 烟草总蛋白质的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.12 蛋白质浓度的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.13 蛋白质的SDS-PAGE检测 | 第39-42页 |
| 第3章 结果 | 第42-56页 |
| 3.1 质粒构建中的酶切反应结果 | 第42页 |
| 3.2 喜树SLS候选基因粘性末端的处理 | 第42-43页 |
| 3.3 质粒构建的测序结果 | 第43-44页 |
| 3.4 表达载体构建的测序结果 | 第44-46页 |
| 3.5 质粒构建的双酶切验证 | 第46-47页 |
| 3.6 目的片段连接转化与重组质粒的筛选结果 | 第47-48页 |
| 3.7 电击转化将植物表达载体转化到根瘤农杆菌中的PCR鉴定 | 第48页 |
| 3.8 根瘤农杆菌EHA105介导烟草的遗传转化 | 第48-50页 |
| 3.9 表达载体在转基因烟草中的检测 | 第50-52页 |
| 3.9.1 转基因烟草基因组DNA的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 3.9.2 转基因烟草的芽再生培养 | 第51-52页 |
| 3.10 蛋白质的标准曲线 | 第52-53页 |
| 3.11 蛋白质的SDS-PAGE检测图谱 | 第53-56页 |
| 第4章 讨论 | 第56-57页 |
| 4.1 表达载体构建中的酶切反应 | 第56页 |
| 4.2 T-DNA的验证及其蛋白质的表达 | 第56-57页 |
| 第5章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 附录1 | 第67-76页 |
| 附录2 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
