| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1. 前言 | 第12-36页 |
| 1.1 杂草的危害 | 第12页 |
| 1.2 除草剂概述 | 第12-28页 |
| 1.2.1 除草剂的起源 | 第12-14页 |
| 1.2.2 除草剂的作用机理 | 第14-17页 |
| 1.2.3 除草剂的分类 | 第17-28页 |
| 1.2.4 近期除草剂的开发的特点 | 第28页 |
| 1.3 转基因抗除草剂农作物 | 第28-30页 |
| 1.4 草甘膦 | 第30-35页 |
| 1.4.1 草甘膦理化性质 | 第30页 |
| 1.4.2 草甘膦作用机理 | 第30-31页 |
| 1.4.3 生物抗草甘膦的三种策略 | 第31-34页 |
| 1.4.4 转基因抗草甘膦农作物 | 第34-35页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 2. 材料和方法 | 第36-51页 |
| 2.1 材料 | 第36-39页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第36-37页 |
| 2.1.2 试剂 | 第37页 |
| 2.1.3 培养基 | 第37页 |
| 2.1.4 溶液 | 第37-39页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第39页 |
| 2.2 方法 | 第39-51页 |
| 2.2.1 具有草甘膦抗性的海洋细菌的筛选 | 第39页 |
| 2.2.2 海洋菌Brachybacterium paraconglomeratum和Vibrio proteolyticus基因组总DNA的提取 | 第39-41页 |
| 2.2.3 菌株种属特异性鉴定 | 第41页 |
| 2.2.4 抽提pUC18质粒 | 第41-42页 |
| 2.2.5 载体的酶解、脱磷 | 第42页 |
| 2.2.6 海洋菌基因组DNA不完全酶解 | 第42-43页 |
| 2.2.7 载体与不完全酶解的DNA片段酶连 | 第43页 |
| 2.2.8 感受态细胞E.coli DH5α的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.9 转化 | 第44页 |
| 2.2.10 文库验证 | 第44页 |
| 2.2.11 阳性克隆的筛选 | 第44-45页 |
| 2.2.12 生物信息学分析插入片段 | 第45页 |
| 2.2.13 海洋菌Brachybacterium paraconglomeratum中核苷通透酶基因(NupCc)的研究 | 第45-47页 |
| 2.2.14 海洋菌Vibrio proteolyticus中基因Cglh和Cglh0的研究 | 第47-51页 |
| 3. 结果与分析 | 第51-70页 |
| 3.1 具有草甘膦抗性的海洋细菌的筛选 | 第51-52页 |
| 3.2 海洋菌BRACHYBACTERIUM PARACONGLOMERATUM和VIBRIO PROTEOLYTICUS基因组文库的建立 | 第52-61页 |
| 3.2.1 海洋菌Brachybacterium paraconglomeratum和Vibrio proteolyticus基因组DNA的抽提 | 第52-53页 |
| 3.2.2 菌株种属特异性鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.3 Puc18载体的制备 | 第54页 |
| 3.2.4 海洋菌Brachybacterium paraconglomeratum和Vibrio proteolyticus基因组DNA的部分酶解 | 第54-56页 |
| 3.2.5 对构建的基因组文库进行质量检测 | 第56-57页 |
| 3.2.6 文库中阳性克隆的筛选 | 第57-58页 |
| 3.2.7 用生物信息学对插入片段进行序列分析 | 第58-61页 |
| 3.3 核苷通透酶的相关研究 | 第61-63页 |
| 3.3.1 核苷通透酶基因的克隆 | 第61-62页 |
| 3.3.2 NupCc的表达 | 第62-63页 |
| 3.4 蛋白CGLH和CGLH0的相关研究 | 第63-70页 |
| 3.4.1 基因Cglh和Cglh0的克隆 | 第63-65页 |
| 3.4.2 CglH的表达与纯化 | 第65-66页 |
| 3.4.3 滤纸显色实验研究草甘膦脱水酶CglH的特性 | 第66-67页 |
| 3.4.4 薄层层析实验研究草甘膦脱水酶CglH的特性 | 第67-68页 |
| 3.4.5 液质联用实验研究草甘膦脱水酶CglH的特性 | 第68-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 1. 核苷通透酶核苷酸序列及氨基酸序列 | 第78-79页 |
| 2. 草甘膦脱水酶核苷酸及氨基酸序列 | 第79-80页 |
| 3. 核苷通透酶谱系报告 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
