| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 真菌疏水蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1 疏水蛋白概述 | 第11页 |
| 1.2 真菌疏水蛋白的种类与分布 | 第11-12页 |
| 1.3 真菌疏水蛋白的生物学功能 | 第12页 |
| 1.4 真菌疏水蛋白的应用 | 第12页 |
| 1.5 真菌疏水蛋白基因 | 第12页 |
| 2 基因功能的研究方法 | 第12-17页 |
| 2.1 基因功能研究的策略 | 第12-15页 |
| 2.1.1 基因的生物信息学分析 | 第12-13页 |
| 2.1.2 基因的时空表达谱分析 | 第13-14页 |
| 2.1.3 基因功能的实验策略 | 第14页 |
| 2.1.4 基因编码产物相互作用蛋白的研究策略 | 第14-15页 |
| 2.2 真菌基因功能的研究方法 | 第15-17页 |
| 2.2.1 转座子标签技术 | 第15页 |
| 2.2.2 基于核酸的基因沉默技术 | 第15页 |
| 2.2.3 基因敲除技术 | 第15页 |
| 2.2.4 超表达技术 | 第15-16页 |
| 2.2.5 酵母单/双杂交技术 | 第16页 |
| 2.2.6 T-DNA标签技术 | 第16页 |
| 2.2.7 基因诱捕技术 | 第16页 |
| 2.2.8 基因表达序列分析技术 | 第16页 |
| 2.2.9 微阵列分析技术 | 第16-17页 |
| 2.3 超表达在真菌基因功能研究中的应用 | 第17页 |
| 3 转基因菌株的检测分析方法 | 第17-20页 |
| 3.1 SOUTHERN BLOT分析 | 第17-18页 |
| 3.2 RAPD分析 | 第18-19页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR | 第19页 |
| 3.4 同工酶分析 | 第19-20页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-39页 |
| 1 实验材料 | 第21-26页 |
| 1.1 实验菌株 | 第21页 |
| 1.2 质粒载体 | 第21页 |
| 1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 1.5 主要溶液的配制 | 第23-24页 |
| 1.5.1 抗生素储液 | 第23页 |
| 1.5.2 DNA提取缓冲液 | 第23-24页 |
| 1.5.3 Southern杂交缓冲液 | 第24页 |
| 1.5.4 同工酶染色液 | 第24页 |
| 1.6 培养基 | 第24-26页 |
| 1.6.1 LB液体培养基 | 第24-25页 |
| 1.6.2 YEB培养基 | 第25页 |
| 1.6.3 农杆菌基本培养基(MM) | 第25页 |
| 1.6.4 农杆菌诱导培养基(IM) | 第25页 |
| 1.6.5 共培养培养基(Co-CM) | 第25页 |
| 1.6.6 选择培养基(SM) | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-39页 |
| 2.1 DNA与RNA相关操作 | 第26-27页 |
| 2.1.1 基因组DNA的提取 | 第26页 |
| 2.1.2 DNA的浓缩 | 第26页 |
| 2.1.3 基因组RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.1.4 反转录合成cDNA第一链 | 第27页 |
| 2.2 基因克隆相关操作 | 第27-30页 |
| 2.2.1 PCR | 第27-29页 |
| 2.2.2 DNA的酶切 | 第29页 |
| 2.2.3 酶切片段的去磷酸化 | 第29页 |
| 2.2.4 酶切片段的酶连 | 第29页 |
| 2.2.5 DNA凝胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.6 质粒的抽提 | 第30页 |
| 2.3 转化 | 第30-32页 |
| 2.3.1 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.3.2 E.coli DH5α转化 | 第31页 |
| 2.3.3 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.4 根癌农杆菌电转化 | 第32页 |
| 2.4 基因Po.Hyd过表达TI载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.4.1 过表达Ti载体骨架的构建 | 第32页 |
| 2.4.2 Po.Hyd基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.4.3 基因片段与骨架的连接 | 第33页 |
| 2.5 基因Po.Hyd启动子的克隆 | 第33页 |
| 2.6 根癌农杆菌介导糙皮侧耳的转化 | 第33-34页 |
| 2.6.1 根癌农杆菌毒性的诱导 | 第33-34页 |
| 2.6.2 以糙皮侧耳菌丝为受体的转化 | 第34页 |
| 2.7 转化子的检测与分析 | 第34-39页 |
| 2.7.1 转化子稳定性检测 | 第34页 |
| 2.7.2 PCR检测 | 第34页 |
| 2.7.3 Southern杂交检测 | 第34-36页 |
| 2.7.4 转化子基因组DNA的多态性分析 | 第36页 |
| 2.7.5 转化子菌株的同工酶分析 | 第36-37页 |
| 2.7.6 转化子的实时荧光定量PCR分析 | 第37-38页 |
| 2.7.7 转化子菌丝的荧光镜检 | 第38页 |
| 2.7.8 出菇实验 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-54页 |
| 1 超表达载体构建结果 | 第39-43页 |
| 1.1 gpd基因启动子的克隆结果 | 第39-40页 |
| 1.2 gpd基因终止子的克隆结果 | 第40页 |
| 1.3 Po.Hyd基因的克隆结果 | 第40-41页 |
| 1.4 超表达载体构建结果 | 第41-43页 |
| 2 超表达转化子的检测结果 | 第43-52页 |
| 2.1 特异PCR检测结果 | 第43页 |
| 2.2 Southern杂交检测结果 | 第43-44页 |
| 2.3 转化子基因组DNA的多态性分析结果 | 第44-46页 |
| 2.4 转化子菌株同工酶分析结果 | 第46-49页 |
| 2.4.1 酯酶同工酶检测结果 | 第46-47页 |
| 2.4.2 过氧化物酶同工酶检测结果 | 第47-49页 |
| 2.5 转化子实时荧光定量分析结果 | 第49-50页 |
| 2.6 转化子菌丝形态的观察 | 第50页 |
| 2.7 转化子菌丝镜检的结果 | 第50-51页 |
| 2.8 出菇实验结果 | 第51-52页 |
| 3 基因Po.Hyd启动子的克隆结果 | 第52-54页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第54-57页 |
| 1 疏水蛋白基因 | 第54页 |
| 2 超表达与RNA干涉 | 第54-55页 |
| 3 基因启动子研究 | 第55-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-66页 |