| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一部分 引言 | 第7-22页 |
| 1. 背景知识和研究目的 | 第7-16页 |
| 1.1. Ca~(2+)在植物细胞盐胁迫中的作用 | 第7-8页 |
| 1.2. CBL和CIPK结构介绍 | 第8-9页 |
| 1.2.1. CBL蛋白结构特点 | 第8页 |
| 1.2.2. CIPK蛋白结构特点 | 第8-9页 |
| 1.3. CBL/CIPK信号系统特征及其作用机制 | 第9-15页 |
| 1.3.1. Ca~(2+)与CBL结合机制 | 第9-10页 |
| 1.3.2. CBL-CIPK复合物定位 | 第10-11页 |
| 1.3.3. CBL-CIPK信号网络相互作用机制 | 第11-12页 |
| 1.3.4. CBL-CIPK信号网络功能 | 第12-15页 |
| 1.3.4.1. CBL-CIPK复合体在ABA信号通路中的作用 | 第12-14页 |
| 1.3.4.2. CBL-CIPK信号网络调节低K~+反应的分子机制 | 第14-15页 |
| 1.4. 研究目的 | 第15-16页 |
| 2. 结构生物学和X射线单晶衍射技术 | 第16-17页 |
| 2.1. 结构生物学简介 | 第16-17页 |
| 2.2. X射线单晶衍射技术 | 第17页 |
| 3. 目的基因在大肠杆菌中的克隆和表达 | 第17-22页 |
| 3.1. 质粒载体的构建 | 第18页 |
| 3.2. 原核基因表达的启动子 | 第18-20页 |
| 3.2.1. λ噬菌体PI启动子 | 第19页 |
| 3.2.2. trp-lac启动子 | 第19页 |
| 3.2.3. T7噬菌体启动子 | 第19-20页 |
| 3.3. 真核基因表达的启动子和核糖体结合位点 | 第20-21页 |
| 3.3.1. 可用蛋白酶或溴化氰裂解的融合蛋白的表达 | 第20-21页 |
| 3.3.2. 外源蛋白的分泌型表达 | 第21页 |
| 3.4. 克隆化基因表达水平的提高 | 第21-22页 |
| 第二部分 拟南芥AtCBL9蛋白的原核表达纯化及其晶体生长研究 | 第22-41页 |
| 1. 实验原理 | 第22-26页 |
| 1.1. 琼脂糖凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 1.2. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第23页 |
| 1.3. 分子筛层析 | 第23-24页 |
| 1.4. 蛋白质纯化和筛选 | 第24-25页 |
| 1.5. 蛋白质结晶 | 第25-26页 |
| 2. 材料和方法 | 第26-32页 |
| 2.1. 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1. 克隆菌株DH5α | 第27页 |
| 2.1.2. 表达菌株BL21(DE3) | 第27页 |
| 2.1.3. T4噬菌体DNA连接酶 | 第27页 |
| 2.1.4. PET-22b(+)载体 | 第27-28页 |
| 2.2. PCR体系 | 第28页 |
| 2.3. PCR产物回收 | 第28-29页 |
| 2.4. 限制性酶切反应 | 第29页 |
| 2.5. 感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| 2.6. 转化克隆菌株DH5 | 第30页 |
| 2.7. 菌液PCR鉴定阳性克隆 | 第30页 |
| 2.8. 提取质粒,转化表达菌株BL21(DE3) | 第30-31页 |
| 2.9. 诱导蛋白表达 | 第31页 |
| 2.10. 小试检测 | 第31页 |
| 2.11. AtCBL9大量表达纯化 | 第31-32页 |
| 2.12. 动态光散射(DLS)测定蛋白在溶液中的聚合状态 | 第32页 |
| 2.13. 蛋白晶体生长条件筛选 | 第32页 |
| 3. 结果 | 第32-39页 |
| 3.1. 重组子的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2. AtCBL9蛋白表达检测 | 第33-34页 |
| 3.3. AtCBL9蛋白分子筛层析 | 第34-35页 |
| 3.4. AtCBL9蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第35-36页 |
| 3.5. AtCBL9蛋白动态光散射(DLS)检测结果 | 第36-38页 |
| 3.6. AtCBL9蛋白晶体筛选结果 | 第38-39页 |
| 4. 讨论 | 第39-40页 |
| 5. 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 个人简介 | 第47-49页 |
| 导师简介 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
