| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-33页 |
| 第一章 猪链球菌2型致病机理研究进展 | 第13-25页 |
| 1 前言 | 第13页 |
| 2 猪链球菌2型致病机理 | 第13-19页 |
| 2.1 定植:粘附、侵袭上皮组织 | 第14-15页 |
| 2.2 血中存活及抗吞噬杀伤 | 第15-16页 |
| 2.3 炎性反应及感染性休克 | 第16-17页 |
| 2.4 中枢神经系统感染 | 第17-19页 |
| 参考文献 | 第19-25页 |
| 第二章 限制性修饰系统的研究进展 | 第25-33页 |
| 1 R-M系统的简介 | 第25-26页 |
| 2 R-M系统的分类 | 第26页 |
| 3 R-M系统的功能 | 第26-29页 |
| 3.1 自私基因 | 第26-27页 |
| 3.2 稳定基因岛 | 第27页 |
| 3.3 促进基因重组 | 第27页 |
| 3.4 DNA腺嘌呤甲基化 | 第27页 |
| 3.5 相变作用 | 第27-29页 |
| 参考文献 | 第29-33页 |
| 第二篇 试验研究 | 第33-87页 |
| 第三章 猪链球菌2型抗吞噬相关基因的筛选 | 第33-47页 |
| 1 材料与方法 | 第34-39页 |
| 1.1 菌株、细胞和质粒 | 第34页 |
| 1.2 试剂和引物 | 第34页 |
| 1.3 猪链球菌2型转座突变体文库的构建 | 第34-35页 |
| 1.3.1 SS2感受态的制备 | 第34-35页 |
| 1.3.2 电转化 | 第35页 |
| 1.3.3 转座突变株的筛选与鉴定 | 第35页 |
| 1.4 转座子插入位点的随机性检测 | 第35-38页 |
| 1.4.1 基因组DNA的提取 | 第35-37页 |
| 1.4.2 基因组DNA的酶切 | 第37页 |
| 1.4.3 酶切产物的回收与连接 | 第37页 |
| 1.4.4 转座子随机性插入的反向PCR检测 | 第37-38页 |
| 1.5 猪链球菌2型抗吞噬突变株的筛选 | 第38-39页 |
| 1.5.1 抗吞噬突变株的定性筛选 | 第38页 |
| 1.5.2 抗吞噬突变株的定量筛选 | 第38页 |
| 1.5.3 抗吞噬突变株的透射电镜观察 | 第38-39页 |
| 1.6 SS2抗吞噬相关基因的鉴定 | 第39页 |
| 2 结果 | 第39-43页 |
| 2.1 猪链球菌2型转座突变体文库的构建 | 第39-40页 |
| 2.2 SS2突变体中转座子插入位点的随机性 | 第40-41页 |
| 2.3 猪链球菌2型抗吞噬能力减弱突变株的筛选 | 第41-42页 |
| 2.4 SS2抗吞噬相关基因的鉴定及分析 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 第四章 猪链球菌2型hsdS基因抗吞噬功能的验证 | 第47-71页 |
| 1 材料与方法 | 第48-54页 |
| 1.1 菌株、细胞和质粒 | 第48页 |
| 1.2 试验试剂 | 第48页 |
| 1.3 hsdS抗吞噬功能的验证 | 第48-49页 |
| 1.3.1 互补载体构建 | 第48-49页 |
| 1.3.2 互补株的构建 | 第49页 |
| 1.3.3 互补株遗传稳定性的鉴定 | 第49页 |
| 1.3.4 吞噬试验 | 第49页 |
| 1.4 生长曲线的测定 | 第49-50页 |
| 1.5 小胶质细胞内存活 | 第50页 |
| 1.6 全血存活 | 第50页 |
| 1.7 耐酸性试验 | 第50页 |
| 1.8 过氧化氢试验 | 第50页 |
| 1.9 NO检测 | 第50-51页 |
| 1.10 细胞因子检测 | 第51页 |
| 1.11 转录组分析 | 第51-54页 |
| 1.11.1 SS2细菌总RNA提取 | 第51-52页 |
| 1.11.2 RNA样品的检测 | 第52页 |
| 1.11.3 转录组测序及分析 | 第52页 |
| 1.11.4 转录组结果的qRT-PCR验证 | 第52-54页 |
| 2 结果 | 第54-65页 |
| 2.1 互补质粒的鉴定 | 第54页 |
| 2.2 hsdS突变互补株的鉴定 | 第54-55页 |
| 2.3 hsdS抗吞噬功能的验证 | 第55-56页 |
| 2.4 生长特性分析 | 第56页 |
| 2.5 小胶质细胞内存活能力分析 | 第56-57页 |
| 2.6 血中存活能力比较 | 第57-58页 |
| 2.7 耐酸性分析 | 第58-59页 |
| 2.8 氧化应激的分析 | 第59页 |
| 2.9 NO检测分析 | 第59-60页 |
| 2.10 细胞因子的检测 | 第60-61页 |
| 2.11 转录组分析 | 第61-65页 |
| 2.11.1 RNA的质量检测 | 第61-62页 |
| 2.11.2 基因表达分析 | 第62-63页 |
| 2.11.3 GO分类和富集分析 | 第63-64页 |
| 2.11.4 信号通路分析 | 第64-65页 |
| 2.11.5 转录组qRT-PCR验证结果 | 第65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 第五章 猪链球菌2型Ⅰ型R-M系统抗吞噬功能的分析 | 第71-87页 |
| 1 材料与方法 | 第72-76页 |
| 1.1 菌株、细胞和质粒 | 第72页 |
| 1.2 试剂和引物 | 第72-74页 |
| 1.3 缺失载体的构建 | 第74-75页 |
| 1.4 缺失株的构建 | 第75页 |
| 1.4.1 电转化 | 第75页 |
| 1.4.2 缺失株的筛选及鉴定 | 第75页 |
| 1.5 缺失株遗传稳定性的鉴定 | 第75-76页 |
| 1.6 缺失株生物学特性分析 | 第76页 |
| 1.6.1 生长曲线的测定 | 第76页 |
| 1.6.2 吞噬率的检测 | 第76页 |
| 1.6.3 细胞因子检测 | 第76页 |
| 2 结果 | 第76-81页 |
| 2.1 缺失质粒的鉴定 | 第76-77页 |
| 2.2 缺失株的鉴定 | 第77-79页 |
| 2.3 缺失株生物学特性分析 | 第79-81页 |
| 2.3.1 生长特性分析 | 第79页 |
| 2.3.2 抗吞噬能力分析 | 第79-80页 |
| 2.3.3 细胞因子检测分析 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 全文总结 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 附表 | 第91-99页 |