| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 抗生素生产现状 | 第13-16页 |
| 1.1.1 抗生素及其生产简介 | 第13-14页 |
| 1.1.2 几种抗生素概述 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1. 阿霉素 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2. 埃博霉素 | 第15-16页 |
| 1.1.2.3. 头孢菌素 | 第16页 |
| 1.2 埃博霉素发酵研究背景概述 | 第16-19页 |
| 1.2.1 埃博霉素与粘细菌 | 第16-17页 |
| 1.2.2 提高埃博霉素发酵产量方法 | 第17-19页 |
| 1.2.2.1. 埃博霉素的异源表达 | 第17-18页 |
| 1.2.2.2. 培养基及发酵方法优化 | 第18页 |
| 1.2.2.3. 纤维堆囊菌的分散生长驯化 | 第18-19页 |
| 1.3 去乙酰头孢菌素C研究背景概述 | 第19-22页 |
| 1.3.1 去乙酰头孢菌素C的合成与调控 | 第19-21页 |
| 1.3.2 状真菌转化方法概述 | 第21-22页 |
| 1.3.2.1. PEG/CaCl_2介导的原生质体转化法 | 第21页 |
| 1.3.2.2. 基因枪法 | 第21-22页 |
| 1.3.2.3. 农杆菌介导转化法 | 第22页 |
| 1.4 本论文主要研究内容 | 第22-25页 |
| 第二章 埃博霉素类化合物种类及产量的优化 | 第25-49页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-32页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第25-26页 |
| 2.1.2 培养基与实验试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.4 埃博霉素发酵及检测 | 第27-28页 |
| 2.1.5 菌株质粒检测 | 第28-30页 |
| 2.1.5.1. 粘球菌落PCR | 第28-29页 |
| 2.1.5.2. 粘球菌质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.1.6 荧光定量PCR检测修饰酶表达量 | 第30-32页 |
| 2.1.6.1. 提取RNA | 第30页 |
| 2.1.6.2. 消除基因组 | 第30-31页 |
| 2.1.6.3. RNA反转录cDNA | 第31页 |
| 2.1.6.4. 荧光定量PCR引物信息 | 第31-32页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第32-46页 |
| 2.2.1 含有埃博霉素修饰酶基因的异源表达菌株质粒检测 | 第32-33页 |
| 2.2.1.1. 菌落PCR | 第32页 |
| 2.2.1.2. 以提取质粒为模板扩增目的片段 | 第32-33页 |
| 2.2.2 修饰酶基因荧光定量PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.2.3 埃博霉素修饰产物发酵检测 | 第34页 |
| 2.2.4 添加酵母浸粉的影响 | 第34-37页 |
| 2.2.4.1. 添加酵母浸粉对检测的影响 | 第34-35页 |
| 2.2.4.2. 添加酵母浸粉对产量的影响 | 第35-37页 |
| 2.2.5 CYE培养基发酵结果 | 第37-39页 |
| 2.2.6 添加甲基丙二酸对产量的影响 | 第39-40页 |
| 2.2.7 添加吲哚乙酸对产量的影响 | 第40-41页 |
| 2.2.8 添加物对纤维堆囊菌和粘球菌作用对比 | 第41-42页 |
| 2.2.9 油酸甲酯添加时间点对产量的影响 | 第42-43页 |
| 2.2.10 在24小时处不同油酸甲酯添加量对产量的影响 | 第43-44页 |
| 2.2.11 添加三油酸甘油酯对产量的影响 | 第44-46页 |
| 2.3 小结 | 第46-49页 |
| 第三章 顶头孢霉遗传改造方法探索 | 第49-69页 |
| 3.1 材料与方法 | 第49-59页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第49页 |
| 3.1.2 培养基 | 第49-50页 |
| 3.1.3 实验试剂和常用试剂盒 | 第50-51页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第51-52页 |
| 3.1.5 敲除载体构建 | 第52-55页 |
| 3.1.5.1. 敲除载体1构建 | 第52页 |
| 3.1.5.2. 敲除载体2构建 | 第52-55页 |
| 3.1.6 顶头孢霉菌丝培养 | 第55页 |
| 3.1.7 顶头孢霉原生质体的制备 | 第55-56页 |
| 3.1.8 顶头孢霉原生质体的转化和再生 | 第56页 |
| 3.1.9 大肠杆菌超级感受态制备 | 第56页 |
| 3.1.10 大肠杆菌转化 | 第56-57页 |
| 3.1.11 基因组提取 | 第57页 |
| 3.1.12 PCR验证hyg基因和cefG基因 | 第57-58页 |
| 3.1.13 发酵产物验证 | 第58-59页 |
| 3.1.13.1. 转化子发酵 | 第58页 |
| 3.1.13.2. 高效液相色谱发酵液检测 | 第58-59页 |
| 3.2 结果及讨论 | 第59-66页 |
| 3.2.1 敲除载体1检测 | 第59-60页 |
| 3.2.2 敲除载体2检测 | 第60-61页 |
| 3.2.3 顶头孢霉的培养 | 第61-63页 |
| 3.2.4 原生质体制备条件探索 | 第63-64页 |
| 3.2.5 顶头孢霉原生质体的转化和再生 | 第64-66页 |
| 3.2.6 顶头孢霉转化子检测 | 第66页 |
| 3.3 小结 | 第66-69页 |
| 总结与展望 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 附件 | 第77页 |
