| 创新点 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 EV71与手足口病防治研究现状 | 第13-29页 |
| 1.1 小RNA病毒科的成员 | 第13-18页 |
| 1.2 肠道病毒属(Enteroviruses) | 第18-19页 |
| 1.3 肠病毒71型(Enterovirus 71) | 第19-24页 |
| 1.3.1 EV71的基因组结构 | 第20-21页 |
| 1.3.2 EV71的病毒粒子 | 第21-22页 |
| 1.3.3 EV71分型 | 第22页 |
| 1.3.4 EV71的感染过程 | 第22-23页 |
| 1.3.5 EV71基因组复制 | 第23页 |
| 1.3.6 EV71分离培养 | 第23-24页 |
| 1.3.7 EV71的传播途径 | 第24页 |
| 1.4 人手足口病 | 第24-25页 |
| 1.5 抗EV71治疗和免疫 | 第25-29页 |
| 1.5.1 抗EV71的药物治疗 | 第25-27页 |
| 1.5.2 EV71疫苗研究 | 第27-29页 |
| 第二章 杆状病毒表达系统 | 第29-42页 |
| 2.1 杆状病毒的分子生物学特性 | 第29-32页 |
| 2.2 杆状病毒表达系统 | 第32-40页 |
| 2.2.1 重组杆状病毒的策略 | 第32-33页 |
| 2.2.2 Bac to Bac系统 | 第33-34页 |
| 2.2.3 Gateway?LR Clonase(BaculoDirect)系统 | 第34-35页 |
| 2.2.4 Multibac表达系统 | 第35-36页 |
| 2.2.5 零背景转座系统 | 第36页 |
| 2.2.6 家蚕Multibac系统 | 第36-39页 |
| 2.2.7 细菌间结合进入系统 | 第39-40页 |
| 2.3 家蚕生物反应器 | 第40-41页 |
| 2.4 Luciferase双荧光报告系统 | 第41-42页 |
| 第三章 利用多拷贝策略提高重组杆状病毒外源基因表达效率研究 | 第42-69页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-59页 |
| 3.1.1 实验所需的试剂与仪器 | 第42-44页 |
| 3.1.2 质粒与菌株 | 第44-45页 |
| 3.1.3 分子克隆的方法与步骤 | 第45-49页 |
| 3.1.4 双荧光报告基因转移载体构建 | 第49-53页 |
| 3.1.5 含有不同拷贝数P1和3CD片段的转移质粒构建 | 第53-57页 |
| 3.1.6 利用含BmBacmid的DAP营养缺陷型大肠杆菌注射家蚕 | 第57-58页 |
| 3.1.7 Grace's昆虫细胞培养基的配置与昆虫细胞培养 | 第58-59页 |
| 3.1.8 BmNPV病毒在家蚕体内增殖的鉴定 | 第59页 |
| 3.1.9 不同拷贝数基因的表达效率分析 | 第59页 |
| 3.2 结果 | 第59-65页 |
| 3.2.1 重组病毒的滴度 | 第59-60页 |
| 3.2.2 荧光素酶转移载体的构建及鉴定 | 第60-62页 |
| 3.2.3 不同拷贝数荧光素酶基因在重组杆状病毒中的表达效率 | 第62-63页 |
| 3.2.4 含有多拷贝外源片段的家蚕杆状病毒的鉴定 | 第63-64页 |
| 3.2.5 含有重组BmBacmid的侵染型大肠杆菌侵染家蚕及致死率 | 第64-65页 |
| 3.3 讨论 | 第65-69页 |
| 第四章 重组杆状病毒不同策略表达EV71蛋白生产VLPs及VLPs产量比较 | 第69-90页 |
| 4.1 材料与方法 | 第69-80页 |
| 4.1.1 菌株、质粒与分子克隆 | 第69页 |
| 4.1.2 重组杆状病毒和EV71病毒核酸的提取 | 第69-70页 |
| 4.1.3 逆转录PCR | 第70-71页 |
| 4.1.4 含有不同拷贝数P1和3CD片段的转移质粒的构建 | 第71-73页 |
| 4.1.5 重组病毒的构建 | 第73-74页 |
| 4.1.6 Western Blot分析 | 第74页 |
| 4.1.7 利用DAP缺陷型细菌感染Sf9细胞 | 第74-77页 |
| 4.1.8 细胞的转瓶培养 | 第77-78页 |
| 4.1.9 利用转瓶培养细胞大量感染重组杆状病毒大量生产VLP颗粒及及其纯化 | 第78-79页 |
| 4.1.10 扫描电镜观察EV71 VLPs | 第79-80页 |
| 4.2 结果 | 第80-87页 |
| 4.2.1 重组病毒滴度 | 第80-81页 |
| 4.2.2 EV71VLPs的纯化 | 第81-82页 |
| 4.2.3 3CD蛋白对P1蛋白裂解效率的分析 | 第82-83页 |
| 4.2.4 EV71蛋白在Multibac系统高效表达 | 第83-84页 |
| 4.2.5 共表达EV71成熟衣壳蛋白能形成VLPs | 第84-86页 |
| 4.2.6 VLP的电镜观察 | 第86页 |
| 4.2.7 VPO与VP2蛋白在形成VLPs时的竞争作用 | 第86-87页 |
| 4.3 讨论 | 第87-90页 |
| 第五章 家蚕GBPBP蛋白与杆状病毒P13蛋白相互作用研究 | 第90-99页 |
| 5.1 材料与方法 | 第91-92页 |
| 5.1.1 LsP13相互作用肽的筛选及序列分析 | 第91页 |
| 5.1.2 RNA提取及基因克隆 | 第91页 |
| 5.1.3 BmGBPBP/His融合蛋白的诱导表达 | 第91-92页 |
| 5.1.4 GST pull down | 第92页 |
| 5.2 结果 | 第92-96页 |
| 5.2.1 BmGBPBP基因序列分析 | 第92-94页 |
| 5.2.2 家蚕BmGBPBP基因和LsNPV P13基因的表达载体构建 | 第94-96页 |
| 5.2.3 LsP13/GST融合蛋白的表达分析 | 第96页 |
| 5.2.4 BmGBPBP/His融合蛋白的表达分析 | 第96页 |
| 5.2.5 LP13与BmGBPBP的体外相互作用 | 第96页 |
| 5.3 讨论 | 第96-99页 |
| 参考文献 | 第99-119页 |
| 博士在读期间发表和待发表的文章 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
