| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词中英文注释表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-27页 |
| 1.1 间质干细胞与肿瘤微环境 | 第17-20页 |
| 1.1.1 肿瘤微环境 | 第17页 |
| 1.1.2 MSC参与肿瘤微环境的形成 | 第17-19页 |
| 1.1.3 MSC与CAF | 第19-20页 |
| 1.2 Exosome与肿瘤 | 第20-23页 |
| 1.2.1 Exosome的特征 | 第20-21页 |
| 1.2.2 Exosome的提取 | 第21-22页 |
| 1.2.3 Exosome与肿瘤 | 第22-23页 |
| 1.3 miRNA与肿瘤微环境 | 第23-27页 |
| 1.3.1 miRNA参与肿瘤微环境重塑 | 第23-24页 |
| 1.3.2 miRNA与exosome | 第24页 |
| 1.3.3 miR-4669 与肿瘤微环境 | 第24-27页 |
| 第二章 研究目的、方法、实验方案及意义 | 第27-31页 |
| 2.1 研究目的 | 第27页 |
| 2.2 研究方法 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方案 | 第28-30页 |
| 2.4 研究意义 | 第30-31页 |
| 第三章 胃癌细胞来源exosome诱导BMMSC向GC-MSC转分化 | 第31-43页 |
| 3.1 材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 标本的采集 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 仪器及相关耗材 | 第32-33页 |
| 3.1.4 细胞株 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 细胞的培养 | 第33-34页 |
| 3.2.2 细胞培养上清收集 | 第34页 |
| 3.2.3 Exosome的提取 | 第34页 |
| 3.2.4 Exosome的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.5 Exosome内总蛋白提取 | 第35页 |
| 3.2.6 Western blot检测 | 第35-36页 |
| 3.2.7 Exosome浓度测定 | 第36页 |
| 3.2.8 BM-MSC的分离培养 | 第36页 |
| 3.2.9 免疫荧光 | 第36-37页 |
| 3.2.10 Transwell迁移实验 | 第37页 |
| 3.2.11 数据处理与统计分析 | 第37页 |
| 3.3 结果 | 第37-40页 |
| 3.3.1 胃癌细胞来源exosome的检测鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.2 胃癌细胞来源exosome促进BMMSC中 α-SMA表达 | 第38-39页 |
| 3.3.3 胃癌细胞来源exosome诱导后BMMSC促进胃癌细胞迁移 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-43页 |
| 第四章 Rab27a-si RNA干扰胃癌细胞后exosome降低其转分化作用 | 第43-51页 |
| 4.1 材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.2 主要仪器及相关耗材 | 第43-44页 |
| 4.1.3 细胞株 | 第44页 |
| 4.2 方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 Exosome检测与鉴定 | 第44页 |
| 4.2.2 BMMSC的分离培养 | 第44页 |
| 4.2.3 免疫荧光 | 第44页 |
| 4.2.4 Transwell迁移实验 | 第44页 |
| 4.2.5 寡核苷酸片段配制 | 第44-45页 |
| 4.2.6 siRNA转染 | 第45页 |
| 4.2.7 总RNA的提取 | 第45-46页 |
| 4.2.8 RNA逆转录 | 第46页 |
| 4.2.9 实时荧光定量PCR | 第46-47页 |
| 4.3 结果 | 第47-50页 |
| 4.3.1 Rab27a-siRNA转染胃癌细胞抑制Rab27a的表达 | 第47页 |
| 4.3.2 Rab27a-siRNA转染胃癌细胞抑制其exosome分泌 | 第47-49页 |
| 4.3.3 Rab27a干扰后的胃癌细胞培养上清抑制BMMSC中 α-SMA表达 | 第49页 |
| 4.3.4 Rab27a干扰的胃癌细胞上清诱导后的BMMSC抑制胃癌细胞迁移 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 胃癌细胞exosome携载miR-4669 在BMMSC转分化中的作用 | 第51-67页 |
| 5.1 材料 | 第51-52页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第51-52页 |
| 5.1.2 主要仪器及相关耗材 | 第52页 |
| 5.1.3 细胞株 | 第52页 |
| 5.2 方法 | 第52-56页 |
| 5.2.1 Exosome提取、检测与鉴定 | 第52-53页 |
| 5.2.2 BMMSC的分离培养 | 第53页 |
| 5.2.3 免疫荧光 | 第53页 |
| 5.2.4 Transwell迁移实验 | 第53页 |
| 5.2.5 总RNA提取、逆转录、荧光定量PCR | 第53页 |
| 5.2.6 寡核苷酸片段配置 | 第53页 |
| 5.2.7 miR-4669 mimics转染胃癌细胞及对BMMSC的处理 | 第53-54页 |
| 5.2.8 血管形成实验 | 第54页 |
| 5.2.9 细胞内miRNA提取 | 第54页 |
| 5.2.10 Exosome内总RNA提取 | 第54-55页 |
| 5.2.11 miRNA逆转录 | 第55-56页 |
| 5.2.12 miRNA荧光实时定量PCR | 第56页 |
| 5.3 结果 | 第56-64页 |
| 5.3.1 qRT-PCR筛选验证miR-4669 的表达 | 第56-58页 |
| 5.3.2 miR-4669 过表达后胃癌细胞上清及exosome诱导后BMMSC中 α-SMA表达增强 | 第58-60页 |
| 5.3.3 miR-4669 过表达后胃癌细胞上清及exosome诱导后BMMSC促进胃癌细胞迁移 | 第60-61页 |
| 5.3.4 miR-4669 过表达后胃癌细胞上清诱导后BMMSC促进血管形成 | 第61页 |
| 5.3.5 miR-4669 过表达后胃癌细胞来源exosome诱导后BMMSC中炎性因子的表达增加 | 第61-62页 |
| 5.3.6 过表达miR-4669 的胃癌细胞培养上清或exosome诱导后BMMSC相关基因检测 | 第62-64页 |
| 5.4 讨论 | 第64-67页 |
| 第六章 结论和展望 | 第67-69页 |
| 6.1 结论 | 第67页 |
| 6.2 研究创新点 | 第67页 |
| 6.3 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加会议 | 第79页 |
