| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第16-19页 |
| 第一篇 文献综述 | 第19-38页 |
| 第一章 腔前卵泡体外培养研究进展 | 第19-31页 |
| 1 腔前卵泡体外培养研究概况 | 第19-20页 |
| 2 腔前卵泡的分离方法 | 第20-22页 |
| 2.1 机械法 | 第20-21页 |
| 2.2 酶解法 | 第21-22页 |
| 2.3 机械-酶解法 | 第22页 |
| 3 腔前卵泡培养方法 | 第22-24页 |
| 3.1 普通培养法 | 第22-23页 |
| 3.2 2D培养法 | 第23页 |
| 3.3 3D培养法 | 第23-24页 |
| 4 腔前卵泡体外培养的影响因素 | 第24-30页 |
| 4.1 不同阶段腔前卵泡对体外发育的影响 | 第24-25页 |
| 4.2 培养条件对腔前卵泡体外培养的影响 | 第25-26页 |
| 4.2.1 共培养对腔前卵泡体外发育的影响 | 第25-26页 |
| 4.2.2 氧分压对腔前卵泡体外发育的影响 | 第26页 |
| 4.2.3 其他条件因素对腔前卵泡体外发育的影响 | 第26页 |
| 4.3 培养基对腔前卵泡体外发育的影响 | 第26-30页 |
| 4.3.1 基础培养基对体外培养腔前卵泡的影响 | 第26-27页 |
| 4.3.2 促性腺激素对体外培养腔前卵泡的影响 | 第27-28页 |
| 4.3.3 细胞因子的影响 | 第28-30页 |
| 5 结语 | 第30-31页 |
| 第二章 褪黑素对雌性生殖影响研究进展 | 第31-38页 |
| 1 褪黑素的合成与代谢 | 第31-32页 |
| 2 褪黑素受体与信号转导 | 第32-33页 |
| 3 褪黑素与卵母细胞成熟及胚胎发育 | 第33-36页 |
| 4 褪黑素与卵泡发育 | 第36-38页 |
| 第二篇 研究论文 | 第38-121页 |
| 第三章 猪腔前卵泡来源孤雌激活囊胚的获得 | 第38-56页 |
| 1 引言 | 第38-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-45页 |
| 2.1 试验材料 | 第40页 |
| 2.2 试验试剂 | 第40-41页 |
| 2.3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 2.4 试验耗材 | 第42页 |
| 2.5 溶液配制 | 第42-45页 |
| 3 试验方法 | 第45-50页 |
| 3.1 技术路线 | 第45页 |
| 3.2 腔前卵泡与小囊腔卵泡的分离 | 第45-46页 |
| 3.3 卵泡与卵母细胞直径的测定及成腔卵泡的统计 | 第46页 |
| 3.4 腔前卵泡来源卵母细胞-颗粒细胞复合物(PFs-OGCs)的分离 | 第46-47页 |
| 3.5 小囊腔卵泡来源卵母细胞-颗粒细胞复合物(EAFs-OGCs)的分离 | 第47-48页 |
| 3.6 猪大囊腔卵泡来源卵丘细胞-卵母细胞复合物(COCs)的采集 | 第48页 |
| 3.7 PFs-OGCs与EAFs-OGCs的体外培养 | 第48-49页 |
| 3.8 体外培养OGCs回收率的统计 | 第49页 |
| 3.9 猪卵母细胞的体外成熟培养 | 第49页 |
| 3.10 猪卵母细胞孤雌激活与胚胎培养 | 第49-50页 |
| 3.11 统计与分析 | 第50页 |
| 4 结果与分析 | 第50-54页 |
| 4.1 猪卵巢的选择 | 第50-51页 |
| 4.2 卵泡直径与卵母细胞直径及卵泡腔形成的关系 | 第51-52页 |
| 4.3 卵泡来源OGCs的体外培养结果 | 第52-54页 |
| 5 讨论 | 第54-55页 |
| 6 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 褪黑素对体外培养猪PFs-OGCs的影响 | 第56-70页 |
| 1 引言 | 第56-57页 |
| 2 材料与方法 | 第57-60页 |
| 2.1 试验材料 | 第57页 |
| 2.2 试验试剂 | 第57-58页 |
| 2.3 主要仪器与耗材 | 第58页 |
| 2.4 相关试剂的配制 | 第58-60页 |
| 3 试验方法 | 第60-63页 |
| 3.1 技术路线 | 第60页 |
| 3.2 腔前卵泡的分离 | 第60页 |
| 3.3 PFs-OGCs的分离 | 第60-61页 |
| 3.4 PFs-OGCs的体外培养 | 第61页 |
| 3.5 猪卵母细胞的体外成熟培养 | 第61页 |
| 3.6 猪卵母细胞的孤雌激活与胚胎培养 | 第61页 |
| 3.7 PFs-OGCs总RNA的提取 | 第61-62页 |
| 3.8 PFs-OGCs总RNA逆转录至cDNA | 第62页 |
| 3.9 荧光定量PCR(q-PCR) | 第62-63页 |
| 3.10 q-PCR猪引物列表 | 第63页 |
| 3.11 统计与分析 | 第63页 |
| 4 结果与分析 | 第63-67页 |
| 4.1 不同浓度褪黑素处理对猪PFs-OGCs的影响 | 第63-64页 |
| 4.2 褪黑素与受体抑制剂共同作用对PFs-OGCs的影响 | 第64-67页 |
| 5 讨论 | 第67-69页 |
| 5.1 不同浓度褪黑素对猪PFs-OGCs的影响 | 第67-68页 |
| 5.2 褪黑素与受体抑制剂共处理对PFs-OGCs的影响 | 第68-69页 |
| 6 小结 | 第69-70页 |
| 第五章 褪黑素对体外培养猪鞘膜细胞的影响 | 第70-95页 |
| 1 引言 | 第70-71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-74页 |
| 2.1 试验材料 | 第71页 |
| 2.2 主要试剂 | 第71-72页 |
| 2.3 主要仪器与耗材 | 第72页 |
| 2.4 相关试剂的配制 | 第72-74页 |
| 3 试验方法 | 第74-84页 |
| 3.1 技术路线 | 第74页 |
| 3.2 猪鞘膜细胞的分离与纯化 | 第74-75页 |
| 3.3 不连续密度梯度离心的操作 | 第75-76页 |
| 3.4 细胞免疫荧光染色 | 第76-77页 |
| 3.5 流式细胞术检测细胞抗原表位 | 第77页 |
| 3.6 免疫组织化学染色 | 第77-78页 |
| 3.7 增殖活力检测 | 第78页 |
| 3.8 MTT法检测细胞活力 | 第78-79页 |
| 3.9 流式细胞仪检测鞘膜细胞增殖指数 | 第79页 |
| 3.10 类固醇激素测定 | 第79-80页 |
| 3.11 细胞内活性氧测定 | 第80-81页 |
| 3.12 PFs-OGCs总RNA的提取 | 第81-82页 |
| 3.13 PFs-OGCs总RNA逆转录至cDNA | 第82页 |
| 3.14 荧光定量PCR(q-PCR) | 第82-83页 |
| 3.15 统计分析 | 第83-84页 |
| 4 结果与分析 | 第84-92页 |
| 4.1 猪鞘膜细胞原代培养与纯化结果 | 第84页 |
| 4.2 猪鞘膜细胞结果 | 第84-85页 |
| 4.3 猪鞘膜细胞褪黑素受体检测结果 | 第85-87页 |
| 4.4 不同浓度褪黑素对猪鞘膜细胞活力与增殖的影响结果 | 第87-89页 |
| 4.5 褪黑素对鞘膜细胞激素分泌的影响结果 | 第89-91页 |
| 4.6 褪黑素对猪鞘膜细胞ROS与可过氧化物酶的影响结果 | 第91页 |
| 4.7 褪黑素与Luzindole共同作用对鞘膜细胞的影响结果 | 第91-92页 |
| 5 讨论 | 第92-94页 |
| 6 小结 | 第94-95页 |
| 第六章 褪黑素影响体外培养猪PFs-OGCs的分子机制 | 第95-121页 |
| 1 引言 | 第95页 |
| 2 材料与方法 | 第95-96页 |
| 2.1 试验材料 | 第95页 |
| 2.2 主要试剂 | 第95-96页 |
| 2.3 主要仪器 | 第96页 |
| 3 试验方法 | 第96-104页 |
| 3.1 建库流程 | 第96-97页 |
| 3.2 信息分析流程 | 第97页 |
| 3.3 总RNA提取 | 第97页 |
| 3.4 总RNA质量检测 | 第97-98页 |
| 3.5 mRNA测序文库构建及高通量测序 | 第98页 |
| 3.6 测序结果的初步处理 | 第98-99页 |
| 3.6.1 原始序列数据 | 第98页 |
| 3.6.2 去除杂质数据 | 第98-99页 |
| 3.6.3 Clean reads数据 | 第99页 |
| 3.6.4 与参考序列比对 | 第99页 |
| 3.7 测序质量评估 | 第99-100页 |
| 3.7.1 测序长度分布评估 | 第99页 |
| 3.7.2 测序饱和度分析 | 第99页 |
| 3.7.3 基因表达量统计 | 第99-100页 |
| 3.7.4 基因覆盖度分析 | 第100页 |
| 3.8 差异表达基因筛选 | 第100-101页 |
| 3.8.1 基因表达量计算 | 第100页 |
| 3.8.2 差异表达基因筛选 | 第100-101页 |
| 3.9 基因表达模式聚类分析 | 第101页 |
| 3.10 Gene Ontology功能显著性富集分析 | 第101-102页 |
| 3.11 Pathway显著性富集分析 | 第102-104页 |
| 4 结果分析与讨论 | 第104-120页 |
| 4.1 总RNA质量分析结果 | 第104-105页 |
| 4.2 测序数据结果评估 | 第105-108页 |
| 4.2.1 数据比对统计 | 第105-107页 |
| 4.2.2 测序长度分布 | 第107页 |
| 4.2.3 测序饱和度分析 | 第107-108页 |
| 4.3 基因表达定量统计 | 第108-115页 |
| 4.3.1 基因覆盖度统计 | 第108-109页 |
| 4.3.2 差异表达基因分析 | 第109-115页 |
| 4.4 基因表达模式聚类分析 | 第115页 |
| 4.5 Gene Ontology功能显著性富集分析 | 第115-118页 |
| 4.6 KEGG Pathway显著性富集分析 | 第118-119页 |
| 4.7 差异表达基因q-PCR验证 | 第119-120页 |
| 5 小结 | 第120-121页 |
| 全文总结 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-138页 |
| 致谢 | 第138-140页 |
| 个人简历 | 第140-143页 |
