| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 嗜热菌 Thermotoga naphthophila | 第11-12页 |
| 1.1.1 嗜热菌 Thermotoga naphthophila 简介 | 第11-12页 |
| 1.2 酯酶简介 | 第12-13页 |
| 1.2.1 酯酶定义 | 第12页 |
| 1.2.2 酯酶的结构 | 第12-13页 |
| 1.2.3 酯酶和脂肪酶区别 | 第13页 |
| 1.3 酯酶分类 | 第13-14页 |
| 1.4 酯酶的应用 | 第14-18页 |
| 1.4.1 酯酶在催化方面的应用 | 第14-18页 |
| 1.4.2 酯酶在其它方面的应用 | 第18页 |
| 1.5 酯酶研究展望 | 第18-19页 |
| 1.6 本文研究背景与设计思路 | 第19-20页 |
| 第2章 嗜热酯酶 Tnap-1739 和 Tnap-1753 的构建与表达 | 第20-32页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验仪器与材料 | 第20-22页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第22页 |
| 2.3.2 目的基因 PCR 和纯化 | 第22-23页 |
| 2.3.3 PCR 纯化产物的双酶切及回收纯化 | 第23页 |
| 2.3.4 限制性酶切载体及纯化 | 第23-24页 |
| 2.3.5 目的基因和载体连接 | 第24页 |
| 2.3.6 重组质粒的转化及鉴定 | 第24页 |
| 2.3.7 目的蛋白的诱导表达 | 第24-25页 |
| 2.3.8 温度对工程菌表达目的蛋白水平的影响 | 第25页 |
| 2.3.9 IPTG 浓度对工程菌表达目的蛋白水平的影响 | 第25页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第25-30页 |
| 2.4.1 目的基因 tnap-1739 和 tnap-1753 的扩增 | 第25-26页 |
| 2.4.2 目的基因 tnap-1739 和 tnap-1753 酶切产物纯化回收 | 第26页 |
| 2.4.3 质粒 pET-28a 和 pET-28b 的双酶切及回收 | 第26-27页 |
| 2.4.4 重组质粒 pET-28a-tnap-1739 和 pET-28b-tnap-1753 的构建 | 第27-28页 |
| 2.4.5 重组质粒 pET-28a-tnap-1739 和 pET-28b-tnap -1753 的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4.6 重组质粒 pET-28a- tnap-1739 和 pET-28b- tnap-1753 的鉴定 | 第29页 |
| 2.4.7 目的蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.4.8 Tnap-1739 和 Tnap-1753 酯酶活性初步测定 | 第30页 |
| 2.5 小结 | 第30-32页 |
| 第3章 嗜热酯酶 Tnap-1739 的优化表达与分离纯化 | 第32-37页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验仪器与材料 | 第32-33页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第32-33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33-34页 |
| 3.3.1 温度对工程菌表达目的蛋白水平的影响 | 第33页 |
| 3.3.2 IPTG 浓度对工程菌表达目的蛋白水平的影响 | 第33页 |
| 3.3.3 嗜热酯酶 Tnap-1739 的纯化 | 第33-34页 |
| 3.4 实验结果 | 第34-36页 |
| 3.4.1 温度对工程菌表达目的蛋白水平的影响 | 第34页 |
| 3.4.2 IPTG 浓度对工程菌表达目的蛋白水平的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.3 嗜热酯酶 Tnap-1739 纯化结果 | 第35-36页 |
| 3.5 小结 | 第36-37页 |
| 第4章 嗜热酯酶 Tnap-1739 的酶学性质表征 | 第37-48页 |
| 4.1 引言 | 第37页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第37-38页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第37页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第37-38页 |
| 4.3 实验方法 | 第38-40页 |
| 4.3.1 嗜热酯酶 Tnap-1739 蛋白浓度的测定 | 第38页 |
| 4.3.2 嗜热酯酶 Tnap-1739 底物特异性的测定 | 第38页 |
| 4.3.3 嗜热酯酶 Tnap-1739 最适反应温度的测定 | 第38-39页 |
| 4.3.4 嗜热酯酶 Tnap-1739 最适 pH 的测定 | 第39页 |
| 4.3.5 有机溶剂对酯酶 Tnap-1739 稳定性的影响 | 第39页 |
| 4.3.6 嗜热酯酶 Tnap-1739 的金属离子稳定性 | 第39页 |
| 4.3.7 蛋白纯化倍数和回收率 | 第39-40页 |
| 4.3.8 Tnap-1739 热稳定性和 pH 稳定性研究 | 第40页 |
| 4.3.9 Tnap-1739 酶反应动力学常数的测定 | 第40页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第40-47页 |
| 4.4.1 酯酶 Tnap-1739 蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| 4.4.2 嗜热酯酶 Tnap-1739 底物特异性和比活的测定 | 第40-42页 |
| 4.4.3 嗜热酯酶 Tnap-1739 最适反应温度的测定 | 第42页 |
| 4.4.4 嗜热酯酶 Tnap-1739 最适 pH 的测定 | 第42-43页 |
| 4.4.5 有机溶剂对酯酶 Tnap-1739 稳定性的影响 | 第43-44页 |
| 4.4.6 金属离子对酯酶 Tnap-1739 稳定性的影响 | 第44-45页 |
| 4.4.7 蛋白纯化倍数和回收率计算结果 | 第45页 |
| 4.4.8 酯酶 Tnap-1739 热稳定性和 pH 稳定性研究结果 | 第45-46页 |
| 4.4.9 酯酶 Tnap-1739 动力学常数测定结果 | 第46-47页 |
| 4.5 小结 | 第47-48页 |
| 第5章 嗜热酯酶 Tnap-1739 在催化 Aldol 反应中的应用 | 第48-53页 |
| 5.1 引言 | 第48页 |
| 5.2 实验仪器与材料 | 第48-49页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第48页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第48-49页 |
| 5.3 实验方法 | 第49页 |
| 5.3.1 酯酶 Tnap-1739 催化 Aldol 反应 | 第49页 |
| 5.3.2 薄层层析检测反应进程 | 第49页 |
| 5.3.3 反应产物的纯化 | 第49页 |
| 5.3.4 纯化产物的鉴定 | 第49页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第49-52页 |
| 5.4.1 酶催化 Aldol 反应 | 第49-50页 |
| 5.4.2 Aldol 反应产物的纯化 | 第50-51页 |
| 5.4.3 Aldol 反应产物的鉴定 | 第51-52页 |
| 5.5 小结 | 第52-53页 |
| 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录一：产物 NMR 结果 | 第61-62页 |
| 作者简介及科研成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
