| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第11-25页 |
| 1.1 植物制备沼气和乙醇的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 降解植物的木质素(lignin)的研究进展 | 第12-20页 |
| 1.2.1 木质素的理化性质 | 第12-14页 |
| 1.2.2 木质素的降解方法 | 第14-16页 |
| 1.2.2.1 物理法(Physical Methods) | 第14页 |
| 1.2.2.2 化学法 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2.1 酸处理 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2.2 碱处理 | 第15页 |
| 1.2.2.3 生物法 | 第15-16页 |
| 1.2.3 木质素酶基因的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.3.1 木质素过氧化物酶(Lignin Peroxidase,Lip) | 第17-18页 |
| 1.2.3.1.1 理化性质 | 第17-18页 |
| 1.2.3.1.2 基因与异源性表达研究 | 第18页 |
| 1.2.3.2 锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,MnP) | 第18-19页 |
| 1.2.3.2.1 理化性质 | 第18-19页 |
| 1.2.3.2.2 基因克隆和异源性表达研究 | 第19页 |
| 1.2.3.3、漆酶(Laccase,Lac) | 第19-20页 |
| 1.2.3.3.1 理化性质 | 第19-20页 |
| 1.2.3.3.2 基因克隆和异源性表达研究 | 第20页 |
| 1.3 外源表达系统的研究 | 第20-23页 |
| 1.3.1、枯草芽孢杆菌表达系统研究进展 | 第21页 |
| 1.3.2、巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.3、酿酒酵母表达系统研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 工程菌的构建 | 第25-52页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1.1 菌株与载体 | 第25-26页 |
| 2.1.1.2 分子生物学常用工具酶、抗生素和试剂(盒) | 第26-27页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.1.3 常用培养基和试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.3.1 常用培养基配方 | 第27-28页 |
| 2.1.3.2 常用试剂和缓冲液 | 第28-29页 |
| 2.1.3.2.1 质粒提取试剂 | 第28页 |
| 2.1.3.2.2 基因组DNA提取试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3.2.3 酶活检测试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 试验方法 | 第29-37页 |
| 2.1.4.1 白腐真菌菌株基因组的提取 | 第29页 |
| 2.1.4.2 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.1.4.3 PCR反应体系及反应条件 | 第30页 |
| 2.1.4.4 PCR反应产物的检测与回收 | 第30-31页 |
| 2.1.4.5 表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.1.4.6 E.coil DH5a感受态的制备 | 第32页 |
| 2.1.4.7 重组子的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.1.4.8 酵母工程菌构建 | 第33-34页 |
| 2.1.4.9 重组子的筛选 | 第34-35页 |
| 2.1.4.10 酶活检测 | 第35-36页 |
| 2.1.4.11 枯草芽孢杆菌工程菌的构建 | 第36页 |
| 2.1.4.12 枯草芽孢杆菌工程菌重组子的筛选 | 第36-37页 |
| 2.2 结果与分析 | 第37-52页 |
| 2.2.1 构建含有lip基因的工程菌 | 第37-43页 |
| 2.2.1.1 构建含有lip的表达载体 | 第37-40页 |
| 2.2.1.2 构建含lip基因的毕赤酵母工程菌及表达产物的酶活性分析 | 第40-42页 |
| 2.2.1.2.1 构建含lip基因的毕赤酵母工程菌 | 第40-41页 |
| 2.2.1.2.2 在毕赤酵母工程菌中分泌表达的liP的酶活性分析 | 第41-42页 |
| 2.2.1.3 构建含lip基因的枯草芽孢杆菌工程菌及其表达产物的酶活性分析 | 第42页 |
| 2.2.1.3.1 构建含有lip基因的枯草芽孢杆菌工程菌 | 第42页 |
| 2.2.1.3.2 在枯草芽孢杆菌工程菌中分泌表达的liP的酶活性分析 | 第42页 |
| 2.2.1.4 构建含有lip基因的酿酒酵母工程菌及其表达产物的酶活性分析 | 第42-43页 |
| 2.2.1.4.1 构建含有lip基因的酿酒酵母工程菌 | 第42-43页 |
| 2.2.1.4.2 在酿酒酵母工程菌中分泌表达的liP的酶活性分析 | 第43页 |
| 2.2.2 构建含有mnp基因的工程菌 | 第43-49页 |
| 2.2.2.1 构建含有mnp基因的表达载体 | 第43-46页 |
| 2.2.2.2 构建含mnp基因的毕赤酵母工程菌及表达产物的酶活性分析 | 第46-47页 |
| 2.2.2.2.1 构建含mnp基因的毕赤酵母工程菌 | 第46-47页 |
| 2.2.2.2.2 在毕赤酵母工程菌中分泌表达的MnP的酶活性分析 | 第47页 |
| 2.2.2.3 构建含有mnp基因的枯草芽孢杆菌工程菌及表达产物的酶活性分析 | 第47-48页 |
| 2.2.2.3.1 构建含有mnp基因的枯草芽孢杆菌工程菌 | 第47-48页 |
| 2.2.2.3.2 在枯草芽孢杆菌工程菌中分泌表达的MnP的酶活性分析 | 第48页 |
| 2.2.2.4 构建含mnp基因的酿酒酵母工程菌及表达产物的酶活性分析 | 第48-49页 |
| 2.2.2.4.1 构建含mnp基因的酿酒酵母工程菌 | 第48-49页 |
| 2.2.2.4.2 在酿酒酵母工程菌中分泌表达的MnP的酶活性分析 | 第49页 |
| 2.2.3 构建含lac基因的工程菌 | 第49-52页 |
| 2.2.3.1 构建含lac基因的毕赤酵母工程菌 | 第49-50页 |
| 2.2.3.2 构建含lac基因的枯草芽孢杆菌工程菌及其表达产物的酶活性分析 | 第50-51页 |
| 2.2.3.2.1 构建含lac基因的枯草芽孢杆菌工程菌 | 第50页 |
| 2.2.3.2.2 在枯草芽孢杆菌工程菌中分泌表达的Lac的酶活性分析 | 第50-51页 |
| 2.2.3.3 构建含lac基因的酿酒酵母工程菌及其表达产物的酶活性分析 | 第51-52页 |
| 2.2.3.3.1 构建含lac基因的酿酒酵母工程菌 | 第51页 |
| 2.2.3.2.2 在酿酒酵母工程菌中分泌表达的lac的酶活性分析 | 第51-52页 |
| 第三章 用工程菌预处理水稻秸秆 | 第52-63页 |
| 3.1 材料与方法 | 第52-55页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 3.1.2 主要设备 | 第52页 |
| 3.1.3 实验方法 | 第52-55页 |
| 3.2 结果与分析 | 第55-63页 |
| 3.2.1 扫描电子显微镜镜镜检预处理后的水稻秸秆 | 第55-61页 |
| 3.2.2 沼气发酵结果 | 第61-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 结论及创新之处 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65-66页 |
| 5.2 创新之处 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录一 缩写词(Abbreviation) | 第73-74页 |
| 附录二 lip基因与基因编号X12698.1序列的比对 | 第74-75页 |
| 附录三 mnp基因与基因编号为J04624.1序列的比对 | 第75-76页 |
| 后记 | 第76页 |
