| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第14-21页 |
| 1 氧化应激的概念 | 第14页 |
| 2 氧化应激与女性围绝经期 | 第14-16页 |
| 2.1 氧化应激影响卵巢内分泌功能 | 第14-15页 |
| 2.2 氧化应激影响卵子及胚胎质量 | 第15页 |
| 2.3 氧化应激影响卵巢储备功能 | 第15-16页 |
| 3 氧化应激与细胞凋亡的关系 | 第16-19页 |
| 3.1 线粒体介导的细胞凋亡 | 第16页 |
| 3.2 死亡受体途径 | 第16-17页 |
| 3.3 内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）反应途径 | 第17页 |
| 3.4 ROS和p53相互作用诱导细胞凋亡 | 第17-18页 |
| 3.5 丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路 | 第18页 |
| 3.6 核转录因子（nuclear factor-κB，NF-κB） | 第18-19页 |
| 4 围绝经期卵巢衰老治疗现状 | 第19页 |
| 5 本课题研究背景及设想 | 第19-21页 |
| 第一章 大鼠卵巢颗粒细胞体外培养及哈蟆油含药血清对其增殖功能的影响 | 第21-33页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1 试剂及仪器 | 第21-22页 |
| 1.2 实验动物 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.1 研制哈蟆油药粉 | 第22页 |
| 2.2 含药血清的制备 | 第22页 |
| 2.3 大鼠卵巢颗粒细胞的分离和原代培养 | 第22-23页 |
| 2.4 卵巢颗粒细胞生长及形态学观察 | 第23页 |
| 2.5 HE染色法观察卵巢颗粒细胞形态 | 第23页 |
| 2.6 促卵泡生成素受体（FSHR）表达鉴定卵巢颗粒细胞 | 第23-24页 |
| 2.7 CCK-8法检测卵巢颗粒细胞活性（OD值） | 第24页 |
| 2.8 统计学方法 | 第24页 |
| 3 实验结果 | 第24-30页 |
| 3.1 卵巢颗粒细胞生长曲线 | 第24-25页 |
| 3.2 卵巢颗粒细胞形态学观察 | 第25页 |
| 3.3 FSHR表达鉴定卵巢颗粒细胞 | 第25-26页 |
| 3.4 不同浓度含药血清对卵巢颗粒细胞活性的影响 | 第26-29页 |
| 3.5 20%含药血清作用不同时间对卵巢颗粒细胞活性的影响 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-33页 |
| 第二章 哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用 | 第33-44页 |
| 1 实验材料 | 第33-34页 |
| 1.1 试剂及仪器 | 第33-34页 |
| 1.2 实验动物 | 第34页 |
| 1.3 受试药物 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-36页 |
| 2.1 含药血清的制备 | 第34页 |
| 2.2 大鼠卵巢颗粒细胞的分离和原代培养 | 第34页 |
| 2.3 CCK-8法检测H_2O_2作用卵巢颗粒细胞的最适浓度 | 第34页 |
| 2.4 细胞实验分组及药物处理 | 第34页 |
| 2.5 CCK-8法检测哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞活性的影响 | 第34-35页 |
| 2.6 DAPI染色观察卵巢颗粒细胞核形态的变化 | 第35页 |
| 2.7 Annexin V/PI染色结合流式细胞仪检测卵巢颗粒细胞凋亡率 | 第35页 |
| 2.8 DCFH-DA染色结合流式细胞仪检测卵巢颗粒细胞ROS水平 | 第35页 |
| 2.9 罗丹明123染色结合流式细胞仪检测卵巢颗粒细胞线粒体膜电位水平 | 第35页 |
| 2.10 统计学处理 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-42页 |
| 3.1 哈蟆油含药血清对H_2O_2作用卵巢颗粒细胞活力的影响 | 第36-37页 |
| 3.2 哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞凋亡的影响 | 第37-39页 |
| 3.3 哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞ROS水平的影响 | 第39-41页 |
| 3.4 哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞线粒体膜电位水平的影响 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的机制研究 | 第44-60页 |
| 1 实验材料 | 第44-45页 |
| 1.1 试剂及仪器 | 第44-45页 |
| 1.2 实验动物 | 第45页 |
| 1.3 受试药物 | 第45页 |
| 1.4 主要试剂的配置 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-51页 |
| 2.1 qRT-PCR检测凋亡相关基因和MAPK信号通路基因mRNA的表达水平 | 第45-49页 |
| 2.2 Western blot检测凋亡相关蛋白和MAPK信号通路蛋白的表达水平 | 第49-50页 |
| 2.3 统计学处理 | 第50-51页 |
| 3 实验结果 | 第51-57页 |
| 3.1 各基因的扩増曲线和溶解曲线 | 第51-52页 |
| 3.2 哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞p53、Bax、Bcl-2、caspase-3、ERK2、JNK、p38 MAPK mRNA水平的影响 | 第52-54页 |
| 3.3 哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞p53、Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响 | 第54-56页 |
| 3.4 哈蟆油含药血清对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞MAPK信号通路的影响 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 第四章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 1 结论 | 第60页 |
| 2 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 哈蟆油含药血清中有效成分的鉴定结果 | 第75-77页 |
| 统计学审核证明 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
