| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 部分缩略词 | 第8-13页 |
| 1 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第13页 |
| 1.2 国内外研现状 | 第13-20页 |
| 1.2.1 CesA基因的概述 | 第13-15页 |
| 1.2.2 高等植物初生壁和次生壁纤维素生物合成 | 第15-16页 |
| 1.2.3 CesA合成纤维素的作用机理 | 第16-18页 |
| 1.2.4 GA对CesA转录调控机制 | 第18-19页 |
| 1.2.5 纤维素生物合成与木质素生物合成之间存在联系 | 第19-20页 |
| 1.3 研究内容与技术路线 | 第20-22页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 2 慈竹BeCesA基因的克隆 | 第22-53页 |
| 2.1 试验材料与仪器设备 | 第22-24页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试验仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 慈竹BeCesA3和BeCesA4基因的克隆 | 第24-29页 |
| 2.2.1 慈竹笋总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 慈竹cDNA的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.3 全长引物的设计 | 第25页 |
| 2.2.4 慈竹BeCesA基因全长克隆的PCR反应体系和反应程序 | 第25-26页 |
| 2.2.5 PCR产物回收及连接 | 第26-27页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第27-28页 |
| 2.2.7 挑斑摇菌和菌液PCR | 第28页 |
| 2.2.8 质粒提取与酶切验证 | 第28-29页 |
| 2.2.9 测序及结果分析 | 第29页 |
| 2.3 慈竹BeCesA基因的生物信息学分析 | 第29-34页 |
| 2.3.1 慈竹BeCesA基因序列分析 | 第29页 |
| 2.3.2 慈竹BeCesA基因系统发育树的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 慈竹BeCesA基因编码的氨基酸多序列比对 | 第30页 |
| 2.3.4 慈竹BeCesA基因编码的蛋白结构域分析 | 第30页 |
| 2.3.5 初生壁和次生壁相关CesA基因编码蛋白结保守基序分析 | 第30页 |
| 2.3.6 慈竹BeCesA基因组织表达模式分析 | 第30-34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-51页 |
| 2.4.1 慈竹笋RNA提取 | 第34页 |
| 2.4.2 慈竹BeCesA基因PCR克隆 | 第34-36页 |
| 2.4.3 慈竹BeCesA基因序列分析 | 第36-39页 |
| 2.4.4 CesA系统发育树构建 | 第39-40页 |
| 2.4.5 BeCesA基因编码氨基酸多重序列比对 | 第40-45页 |
| 2.4.6 BeCesA基因编码蛋白功能域分析 | 第45-47页 |
| 2.4.7 慈竹BeCesA基因编码蛋白保守基序分析 | 第47-48页 |
| 2.4.8 BeCesA基因RT引物特异性检验 | 第48页 |
| 2.4.9 慈竹BeCesA基因组织表达模式分析 | 第48-51页 |
| 2.5 结论 | 第51-53页 |
| 3 BeCesA基因在笋生长过程中的作用 | 第53-67页 |
| 3.1 试验材料与试剂 | 第53-55页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第53-54页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第54-55页 |
| 3.2 测定方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 BeCesA和木质素生物合成相关基因相对表达水平测定 | 第55页 |
| 3.2.2 纤维含量测定 | 第55-56页 |
| 3.2.3 木质素含量测定 | 第56-57页 |
| 3.2.4 激素含量测定 | 第57页 |
| 3.3 结果与分析 | 第57-65页 |
| 3.3.1 不同高度笋基部第二节间BeCesA基因相对表达水平 | 第57-58页 |
| 3.3.2 不同高度笋细胞壁纤维素含量 | 第58-60页 |
| 3.3.3 不同高度笋细胞壁木质素含量 | 第60-62页 |
| 3.3.4 不同高度笋基部第二节木质素生物合成相关基因相对表达水平 | 第62页 |
| 3.3.5 不同高度笋激素含量 | 第62-65页 |
| 3.4 结论 | 第65-67页 |
| 4 外源GA_3及DMZ对慈竹侧枝生长发育的影响 | 第67-87页 |
| 4.1 试验材料与试剂 | 第67-68页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第67-68页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第68页 |
| 4.2 测定方法 | 第68-69页 |
| 4.2.1 慈竹次生壁生物合成相关基因相对表达水平测定 | 第68页 |
| 4.2.2 组织形态解剖及组织化学染色 | 第68-69页 |
| 4.2.3 纤维素含量测定 | 第69页 |
| 4.2.4 纤维形态分析 | 第69页 |
| 4.2.5 木质素含量测定 | 第69页 |
| 4.3 结果与分析 | 第69-85页 |
| 4.3.1 BeCesA基因相对表达水平分析 | 第69-71页 |
| 4.3.2 GA_3和DMZ对慈竹侧枝生长的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.3 GA_3和DMZ对侧枝节间长度和直径的影响 | 第72-75页 |
| 4.3.4 不同处理侧枝组织形态解剖 | 第75-77页 |
| 4.3.5 GA_3和DMZ对纤维形态的影响 | 第77-78页 |
| 4.3.6 纤维素含量 | 第78-81页 |
| 4.3.7 BeNAC、BeMYB基因相对表达水平分析 | 第81-82页 |
| 4.3.8 木质素含量测定 | 第82-84页 |
| 4.3.9 木质素生物合成相关基因表达水平分析 | 第84页 |
| 4.3.10 GA_3和DMZ对叶片的影响 | 第84-85页 |
| 4.4 结论 | 第85-87页 |
| 5 慈竹BeCesA基因过表达载体的构建 | 第87-93页 |
| 5.1 试验材料及仪器 | 第87页 |
| 5.1.1 试验菌种、质粒及试剂 | 第87页 |
| 5.1.2 试验主要仪器 | 第87页 |
| 5.2 试验方法 | 第87-91页 |
| 5.2.1 慈竹BeCesA全长基因过表达引物设计 | 第87页 |
| 5.2.2 慈竹BeCesA基因全长（含有酶切位点）的扩增 | 第87-88页 |
| 5.2.3 慈竹BeCesA全长基因 (含有酶切位点)PCR产物的胶回收和连接 | 第88-89页 |
| 5.2.4 转化大肠杆菌 | 第89页 |
| 5.2.5 菌落蓝白斑筛选、摇菌和质粒提取 | 第89页 |
| 5.2.6 pMD19-T-BeCesA质粒以及pCAMBIA 1303-N质粒双酶切 | 第89页 |
| 5.2.7 双酶切产物胶回收 | 第89页 |
| 5.2.8 过表达载体pCAMBIA1303-N–BeCesA3,4 的构建 | 第89-90页 |
| 5.2.9 阳性克隆的筛选以及质粒PCR验证 | 第90-91页 |
| 5.3 结果与分析 | 第91-92页 |
| 5.3.1 慈竹BeCesA3,4 基因全长（含酶切位点）的扩增以及pCAMBIA 1303-N质粒双酶切 | 第91-92页 |
| 5.4 结论 | 第92-93页 |
| 6 农杆菌EHA105介导的毛白杨遗传转化 | 第93-109页 |
| 6.1 试验材料和仪器 | 第93页 |
| 6.2 试验试剂及培养基配方 | 第93-95页 |
| 6.3 试验方法 | 第95-96页 |
| 6.3.1 pCAMBIA1303-N–BeCesA3,4 质粒转化农杆菌 | 第95-96页 |
| 6.4 叶盘法转化毛白杨叶片 | 第96页 |
| 6.5 转基因毛白杨植物的验证 | 第96-98页 |
| 6.5.1 抗性苗DNA提取 | 第96-97页 |
| 6.5.2 转BeCesA4基因的毛白杨植株的PCR验证 | 第97页 |
| 6.5.3 毛白杨阳性植株BeCesA4基因半定量分析 | 第97-98页 |
| 6.6 BeCesA4过表达对毛表扬的影响 | 第98页 |
| 6.6.1 毛白杨生长发育状况 | 第98页 |
| 6.6.2 纤维素含量测定 | 第98页 |
| 6.7 结果与分析 | 第98-107页 |
| 6.7.1 BeCesA4过表达转基因毛白杨植株的获得 | 第98-100页 |
| 6.7.2 过表达BeCesA4基因对毛白杨生长的影响 | 第100-107页 |
| 6.7.3 过表达BeCesA4基因对转基因毛白杨植株叶片纤维素含量的影响 | 第107页 |
| 6.8 结论 | 第107-109页 |
| 结论 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 攻读硕士学位期间的学术科研情况 | 第118页 |
