| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| 1.1 植物对锌的吸收转运 | 第12-22页 |
| 1.1.1 锌对农业生产的影响 | 第12-13页 |
| 1.1.2 植物对Zn的吸收 | 第13-15页 |
| 1.1.3 ZIP家族转运体 | 第15-16页 |
| 1.1.4 P1B-ATPase家族转运体 | 第16-19页 |
| 1.1.5 CDF家族转运体 | 第19-21页 |
| 1.1.6 Pi和Zn的相互作用 | 第21-22页 |
| 1.2 丛枝菌根对植物ZN吸收影响 | 第22-26页 |
| 1.2.1 菌根真菌简介 | 第22-23页 |
| 1.2.2 丛枝菌根真菌生活史 | 第23-24页 |
| 1.2.3 AMF对植物Zn营养的影响 | 第24-26页 |
| 1.3 实验室前期研究工作 | 第26-27页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-45页 |
| 2.1 材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 植物材料和AM真菌接种剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 培养基和试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-45页 |
| 2.2.1 分子生物学基本实验 | 第30-33页 |
| 2.2.1.1 大肠杆菌感受态制备和转化 | 第30-31页 |
| 2.2.1.2 质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.1.3 农杆菌感受态制备 | 第31页 |
| 2.2.1.4 胶回收 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 苜蓿总DNA提取 | 第32页 |
| 2.2.1.6 RNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.1.7 cDNA合成 | 第33页 |
| 2.2.2 盆栽和水培试验 | 第33-34页 |
| 2.2.3 菌根侵染率检测 | 第34-35页 |
| 2.2.4 RT-PCR | 第35-36页 |
| 2.2.5 MtHMA2和MtMTP3开放阅读框扩增 | 第36页 |
| 2.2.6 组织化学定位 | 第36-37页 |
| 2.2.7 超表达质粒构建 | 第37-38页 |
| 2.2.8 苜蓿毛根转化 | 第38页 |
| 2.2.9 GUS酶活性测定 | 第38-40页 |
| 2.2.9.1 MU标准曲线制备 | 第39页 |
| 2.2.9.2 总蛋白提取 | 第39页 |
| 2.2.9.3 蛋白含量的测定 | 第39-40页 |
| 2.2.10 酵母功能互补实验 | 第40-45页 |
| 2.2.10.2 酵母功能互补质粒的构建 | 第41-43页 |
| 2.2.10.3 酵母突变株构建 | 第43页 |
| 2.2.10.5 酵母功能互补实验 | 第43-44页 |
| 2.2.10.4 MtHMA2蛋白C端不同截短的质粒构建 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-69页 |
| 3.1 苜蓿MtMTP3的鉴定和表达分析 | 第45-53页 |
| 3.1.1 启动子和开放阅读框扩增 | 第45页 |
| 3.1.2 苜蓿MtMTP3基因的生物信息学分析 | 第45-48页 |
| 3.1.3 苜蓿MtMTP3的表达特征 | 第48-49页 |
| 3.1.4 不同重金属处理对MtMTP3表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.5 接种菌根真菌能抑制MtMTP3基因表达 | 第50-52页 |
| 3.1.6 MtMTP3锌转运功能的验证 | 第52-53页 |
| 3.1.7 小结 | 第53页 |
| 3.2 苜蓿Zn转运体的表达分析 | 第53-54页 |
| 3.3 MtHMA2鉴定和功能分析 | 第54-64页 |
| 3.3.1 MtHMA2生物信息学分析 | 第54-57页 |
| 3.3.2 MtHMA2的表达特征 | 第57-59页 |
| 3.3.3 不同金属处理对MtHMA2表达影响 | 第59页 |
| 3.3.4 MtHMA2的功能验证 | 第59-61页 |
| 3.3.5 MtHMA2的C端功能验证 | 第61-62页 |
| 3.3.6 MtHMA2基因在苜蓿根部的超表达实验 | 第62-63页 |
| 3.3.7 小结 | 第63-64页 |
| 3.4 水稻ZIP家族基因表达分析 | 第64-65页 |
| 3.5 水稻HMA家族基因表达分析 | 第65页 |
| 3.6 水稻Nramp家族基因表达分析 | 第65-66页 |
| 3.7 MYCS元件在OSHMA2中功能分析 | 第66-69页 |
| 3.7.1 OsHMA2启动子中CTTC元件缺失 | 第66-67页 |
| 3.7.2 GUS酶活性测定 | 第67-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 4.1 苜蓿MtMTP3鉴定和表达调控分析 | 第69-70页 |
| 4.1.1 MtMTP3是一个CDF家族锌转运体 | 第69页 |
| 4.1.2 MtMTP3可能涉及植物体内Zn转运 | 第69-70页 |
| 4.1.3 菌根可能通过Pi效应抑制MtMTP3表达 | 第70页 |
| 4.2 苜蓿MtHMA2鉴定和表达调控分析 | 第70-71页 |
| 4.2.1 MtHMA2是一个P1B-ATPase家族成员 | 第70-71页 |
| 4.2.2 MtHMA2可能参与地上部分Zn转运 | 第71页 |
| 4.2.3 Mt HMA2的C端序列影响其对Zn和Cd的转运 | 第71页 |
| 4.3 AM真菌对植物体锌吸收和转运的机制 | 第71-72页 |
| 5 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-88页 |
| 附录 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
