| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-34页 |
| 1.1 嗜盐微生物 | 第14-25页 |
| 1.1.1 高盐环境多样性 | 第14-15页 |
| 1.1.2 嗜盐微生物分类学(Taxonomy) | 第15-18页 |
| 1.1.3 渗透压适应机制 | 第18-24页 |
| 1.1.4 嗜盐微生物的生物技术应用 | 第24-25页 |
| 1.2 相溶物质四氢嘧啶 | 第25-32页 |
| 1.2.1 四氢嘧啶的生化特征 | 第25页 |
| 1.2.2 四氢嘧啶的生物代谢途径 | 第25-26页 |
| 1.2.3 ectABC基因簇多样性 | 第26-27页 |
| 1.2.4 doeABCD基因簇多样性 | 第27-29页 |
| 1.2.5 四氢嘧啶合成转录调节 | 第29-30页 |
| 1.2.6 四氢嘧啶工业生产菌株 | 第30-31页 |
| 1.2.7 四氢嘧啶的过量化生产策略 | 第31-32页 |
| 1.2.8 四氢嘧啶的实际应用 | 第32页 |
| 1.3 本研究的立题依据及研究意义 | 第32-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-37页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 2.1.2 主要化学试剂 | 第34页 |
| 2.1.3 培养基 | 第34-35页 |
| 2.1.4 引物 | 第35页 |
| 2.1.5 常用储存液 | 第35-36页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第36页 |
| 2.1.7 常用分子生物学分析软件 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-45页 |
| 2.2.1 样品来源与分离 | 第37-38页 |
| 2.2.2 耐盐梯度与生长特性试验 | 第38页 |
| 2.2.3 基因组DNA抽提、16S rRNA基因PCR扩增与测序 | 第38页 |
| 2.2.4 构建系统发育树 | 第38页 |
| 2.2.5 种群多样性分析 | 第38-39页 |
| 2.2.6 生理生化特性研究 | 第39页 |
| 2.2.7 乙醇法抽提胞内四氢嘧啶 | 第39页 |
| 2.2.8 薄层层析法(TLC)与HPLC定量检测分析 | 第39页 |
| 2.2.9 金属离子影响四氢嘧啶积聚 | 第39-40页 |
| 2.2.10 温度与pH影响四氢嘧啶积聚 | 第40页 |
| 2.2.11 16S rRNA基因PCR-RFLP分析 | 第40页 |
| 2.2.12 16S-23S rRNA ISR多态性分析 | 第40页 |
| 2.2.13 全菌体蛋白SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| 2.2.14 保守ectB基因的PCR扩增 | 第41页 |
| 2.2.15 染色体步移法扩增ectB基因的侧翼序列 | 第41-42页 |
| 2.2.16 基因簇全序列分析 | 第42页 |
| 2.2.17 重组表达载体的构建 | 第42页 |
| 2.2.18 制备E.coli菌株感受态细胞 | 第42-43页 |
| 2.2.19 重组基因的连接 | 第43页 |
| 2.2.20 重组质粒的转化 | 第43页 |
| 2.2.21 重组质粒的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.22 基因的诱导表达与SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| 第三章 结果分析与讨论 | 第45-96页 |
| 3.1 青海湖可培养嗜盐微生物系统发育与种群多样性 | 第45-59页 |
| 3.1.1 青海湖嗜盐菌的形态特征和分类 | 第45-49页 |
| 3.1.2 中度嗜盐菌的生长与生理生化特性 | 第49-51页 |
| 3.1.3 青海湖嗜盐微生物的种群系统发育 | 第51-57页 |
| 3.1.4 总结与讨论 | 第57-59页 |
| 3.2 青海湖优势种群Halomonas的种间多样性分析 | 第59-66页 |
| 3.2.1 青海湖优势种群Halomonas的生长特性 | 第59-61页 |
| 3.2.2 青海湖盐单胞菌属的分子鉴定与典型特征分析 | 第61-62页 |
| 3.2.3 青海湖盐单胞菌属的系统发育分析 | 第62-64页 |
| 3.2.4 总结与讨论 | 第64-66页 |
| 3.3 相溶物质四氢嘧啶的积聚检测与影响因素分析 | 第66-76页 |
| 3.3.1 青海湖中度嗜盐菌的四氢嘧啶的积聚分析 | 第66-69页 |
| 3.3.2 菌株H ventosae QHL5胞内积聚四氢嘧啶影响因素研究 | 第69-74页 |
| 3.3.3 总结与讨论 | 第74-76页 |
| 3.4 四氢嘧啶生物合成基因簇ectABC的特征与结构 | 第76-86页 |
| 3.4.1 青海湖盐单胞菌QHL1的四氢嘧啶生物合成特性 | 第76-77页 |
| 3.4.2 盐单胞菌QHL1基因簇ectABC的克隆 | 第77-81页 |
| 3.4.3 启动子预测比对和ect操纵子的结构分析 | 第81-84页 |
| 3.4.4 总结与讨论 | 第84-86页 |
| 3.5 四氢嘧啶生物合成基因的克隆表达与构建基因工程菌 | 第86-94页 |
| 3.5.1 盐单胞菌Halomonas sp.QHL1 ectA/B/C基因克隆 | 第86-89页 |
| 3.5.2 克隆表达基因簇ectABC | 第89-91页 |
| 3.5.3 重组工程菌耐盐能力与Ectoine积聚量检测 | 第91-92页 |
| 3.5.4 总结与讨论 | 第92-94页 |
| 3.6 结论与展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 主要贡献与创新点 | 第106-107页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第107-108页 |
| 衷心感谢以下基金资助 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
