| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-18页 |
| ·糖尿病简介 | 第8-9页 |
| ·Beta 细胞再生研究现状 | 第9-10页 |
| ·细胞特异性标记与追踪 | 第10-11页 |
| ·双标记载体系统 | 第11-14页 |
| ·胰岛素启动子 | 第11-12页 |
| ·Cre-loxP 重组系统 | 第12-13页 |
| ·Flp-Frt 重组系统 | 第13页 |
| ·内含子 | 第13-14页 |
| ·Cre 重组酶减弱系统 | 第14-15页 |
| ·蛋白降解信号肽 | 第14页 |
| ·内部核糖体进入位点(IRES) | 第14-15页 |
| ·突变型Cre 重组酶 | 第15页 |
| ·基本策略图 | 第15-18页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第18-26页 |
| ·主要的实验试剂和材料 | 第18-19页 |
| ·细胞培养试剂与耗材 | 第18页 |
| ·分子生物学实验试剂及耗材 | 第18-19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·主要实验方法 | 第20-25页 |
| ·细胞培养 | 第20页 |
| ·分子生物学实验 | 第20-25页 |
| ·引物序列 | 第25-26页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第26-50页 |
| ·单质粒 Cre-loxP 重组系统的构建与功能验证 | 第26-32页 |
| ·构建pRIP-iCre | 第26-27页 |
| ·构建pRIP-iCre/Frt2 | 第27-28页 |
| ·构建报告基因质粒pCMV-DsRed/loxP2-EGFP | 第28页 |
| ·构建 Cre-LoxP 的单质粒重组系统 | 第28-30页 |
| ·验证 Cre-loxP 单质粒重组载体的功能 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| ·构建大鼠胰岛素启动子并验证其组织特异性 | 第32-35页 |
| ·构建大鼠胰岛素特异性启动子RIP | 第32-33页 |
| ·构建RIP 功能验证质粒pRIP-EGFP | 第33页 |
| ·验证RIP 的特异性 | 第33-35页 |
| ·小结 | 第35页 |
| ·启动子干扰 | 第35-38页 |
| ·构建启动子干扰质粒pCMV-DsRed-RIP-EGFP | 第36-37页 |
| ·验证启动子干扰 | 第37-38页 |
| ·Cre 重组酶放大作用 | 第38-40页 |
| ·pRIP-iCred2 的构建与验证 | 第40-42页 |
| ·构建pRIP-iCred2 | 第40-41页 |
| ·验证pRIP-iCred2 功能 | 第41-42页 |
| ·pRIP-IRES-iCred2 的构建与验证 | 第42-44页 |
| ·构建pRIP-IRES-iCred2 | 第43页 |
| ·验证pRIP-IRES-iCred2 功能 | 第43-44页 |
| ·pRIP-IRES（S）-iCred2 的构建与验证 | 第44-46页 |
| ·构建pRIP-IRES(S)-iCred2 质粒 | 第44-45页 |
| ·验证pRIP-IRES(S)-iCred2 功能 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46页 |
| ·Cre 酶的定点突变（R173H,R173L） | 第46-50页 |
| ·pRIP-iCre(R173H)及pRIP-iCre(R173L)质粒构建 | 第47页 |
| ·pRIP-iCre(R173H)及pRIP-iCre(R173L)功能验证 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-56页 |
| ·单质粒Cre-loxP 载体的非组织特异性重组 | 第50页 |
| ·RIP 启动子的组织特异性 | 第50-51页 |
| ·启动子干扰 | 第51页 |
| ·Cre 重组酶的信号放大作用 | 第51-52页 |
| ·应对可能存在的问题的策略 | 第52-55页 |
| ·绝缘子屏蔽启动子干扰 | 第52页 |
| ·降低 Cre 的表达量 | 第52-53页 |
| ·降低 Cre 的酶活性 | 第53-54页 |
| ·提高RIP 组织特异性的模拟图 | 第54-55页 |
| ·意义与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录一 试剂配制 | 第64-66页 |
| 附录二 相关载体 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 在校期间科研情况 | 第69页 |
| 个人简历 | 第69页 |
