| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 1. 实验材料与方法 | 第12-33页 |
| 1.1 试剂 | 第12-14页 |
| 1.2 仪器 | 第14-15页 |
| 1.3 高效液相色谱（HPLC）实验 | 第15页 |
| 1.4 乳腺癌组织样本的收集 | 第15页 |
| 1.5 细胞的培养 | 第15-17页 |
| 1.5.1 试剂配制 | 第15-16页 |
| 1.5.2 细胞复苏 | 第16页 |
| 1.5.3 细胞培养 | 第16-17页 |
| 1.5.4 细胞冻存 | 第17页 |
| 1.6 质粒提取 | 第17-20页 |
| 1.6.1 试剂配制 | 第17-18页 |
| 1.6.2 制备感受态细胞 | 第18-19页 |
| 1.6.3 质粒转化 | 第19页 |
| 1.6.4 质粒提取 | 第19-20页 |
| 1.7 DNA电泳 | 第20页 |
| 1.7.1 试剂配制 | 第20页 |
| 1.7.2 琼脂糖电泳 | 第20页 |
| 1.8 实时定量聚合酶链式反应（QRT-PCR） | 第20-23页 |
| 1.8.1 TRIZOL法提取细胞总RNA | 第20-21页 |
| 1.8.2 逆转录实验 | 第21-22页 |
| 1.8.3 Real-time PCR | 第22-23页 |
| 1.8.4 结果计算 | 第23页 |
| 1.9 蛋白免疫印迹分析（Western Blotting） | 第23-27页 |
| 1.9.1 试剂 | 第23-25页 |
| 1.9.2 蛋白提取 | 第25页 |
| 1.9.3 PAGE胶的制备 | 第25页 |
| 1.9.4 电泳与转膜 | 第25-26页 |
| 1.9.5 免疫学反应 | 第26-27页 |
| 1.10 诱导阿霉素耐药乳腺癌细胞株 | 第27页 |
| 1.11 细胞药物敏感实验（CCK-8 实验） | 第27-28页 |
| 1.12 细胞凋亡实验（TUN EL实验） | 第28-29页 |
| 1.13 构建稳定高表达AKR1C3的乳腺癌细胞株 | 第29-31页 |
| 1.13.1 含有目的基因AKR1C3的质粒构建与鉴定 | 第29页 |
| 1.13.2 慢病毒表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 1.13.3 MCF-7 细胞对嘌呤霉素的敏感性检测实验 | 第30页 |
| 1.13.4 病毒载体转染细胞 | 第30页 |
| 1.13.5 筛选稳定高表达AKR1C3的乳腺癌细胞株 | 第30-31页 |
| 1.14 细胞内阿霉素及其代谢物水平的测定 | 第31-32页 |
| 1.14.1 提取方法 | 第31页 |
| 1.14.2 细胞样品的预处理 | 第31-32页 |
| 1.15 统计分析 | 第32-33页 |
| 2. 实验结果 | 第33-50页 |
| 2.1 建立对阿霉素耐药的乳腺癌细胞株 | 第33-35页 |
| 2.2 耐药乳腺癌细胞中，AKR1C3表达水平上调 | 第35-36页 |
| 2.3 建立稳定高表达AKR1C3的乳腺癌细胞株 | 第36-40页 |
| 2.3.1 重组质粒的PCR及测序鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.2 慢病毒的包装及滴度测定 | 第37-38页 |
| 2.3.3 筛选稳定高表达AKR1C3的乳腺癌细胞株 | 第38-39页 |
| 2.3.4 稳转细胞株中AKR1C3表达水平检测 | 第39-40页 |
| 2.4 过表达AKR1C3的乳腺癌细胞对阿霉素耐药 | 第40-43页 |
| 2.5 细胞内阿霉素及其代谢物水平的测定 | 第43-45页 |
| 2.6 PTEN/Akt信号通路参与AKR1C3诱导乳腺癌阿霉素耐药 | 第45-46页 |
| 2.7 Akt抑制剂，LY294002，能够逆转AK R1C3诱导的阿霉素耐药 | 第46-47页 |
| 2.8 AKR1C3与PTEN表达之间存在负相关性 | 第47-50页 |
| 3. 讨论 | 第50-52页 |
| 4. 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 文献综述 | 第59-75页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
