| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 产几丁质酶微生物的种类 | 第13-14页 |
| 1.2 微生物几丁质酶的特点 | 第14页 |
| 1.3 几丁质酶的分类 | 第14-15页 |
| 1.4 几丁质酶的测定方法 | 第15-16页 |
| 1.4.1 几丁质酶总酶活力的测定方法 | 第15页 |
| 1.4.2 内切几丁质酶活力的测定方法 | 第15页 |
| 1.4.3 N-乙酰-葡萄糖胺酶酶活力的测定方法 | 第15-16页 |
| 1.4.4 几丁二糖水解酶活力的测定方法 | 第16页 |
| 1.5 几丁质酶的理化性质 | 第16-17页 |
| 1.5.1 分子量 | 第16页 |
| 1.5.2 最适p H及等电点（p I） | 第16页 |
| 1.5.3 最适温度 | 第16页 |
| 1.5.4 金属离子的影响 | 第16-17页 |
| 1.6 几丁质酶基因的克隆 | 第17页 |
| 1.7 微生物几丁质酶基因的结构 | 第17-19页 |
| 1.7.1 催化区 | 第18页 |
| 1.7.2 几丁质结合区 | 第18-19页 |
| 1.7.3 Fn III结构域 | 第19页 |
| 1.7.4 Cadherin-like结构域 | 第19页 |
| 1.8 几丁质酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.8.1 抑制病原真菌生长 | 第19-20页 |
| 1.8.2 生物酶法生产几丁寡糖的应用 | 第20页 |
| 1.8.3 提供菌体蛋白 | 第20页 |
| 1.9 研究的目的意义与内容 | 第20-22页 |
| 1.9.1 研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 1.9.2 研究的内容 | 第21页 |
| 1.9.3 课题来源 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 菌种来源 | 第22页 |
| 2.1.2 供试病原真菌 | 第22页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.1 试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.2 仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 主要培养基和配制方法 | 第24-25页 |
| 2.4 土壤中产几丁质酶菌株筛选 | 第25页 |
| 2.4.1 Bt几丁质酶产酶菌的筛选 | 第25页 |
| 2.4.2 晶体形态观察 | 第25页 |
| 2.5 Bt几丁质酶基因的克隆和表达 | 第25-27页 |
| 2.5.1 Bt几丁质酶基因的克隆 | 第25页 |
| 2.5.2 DNA回收 | 第25-26页 |
| 2.5.3 E. coli感受态细胞制备 | 第26页 |
| 2.5.4 连接反应 | 第26页 |
| 2.5.5 大肠杆菌热激转化 | 第26页 |
| 2.5.6 E.coli质粒DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.5.7 基因诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第27页 |
| 2.6 Bt几丁质酶活性测定 | 第27页 |
| 2.7 p H值和温度对Bt几丁质酶活力的影响 | 第27页 |
| 2.8 非Bt几丁质酶产酶菌的筛选与鉴定 | 第27-28页 |
| 2.8.1 菌株的筛选与形态特征观察 | 第27-28页 |
| 2.8.2 分子水平鉴定 | 第28页 |
| 2.9 比色法测定产酶菌的酶活力 | 第28-30页 |
| 2.9.1 比色法测定产酶菌的酶活力原理 | 第28页 |
| 2.9.2 酶活体系测定的优化 | 第28-29页 |
| 2.9.3 酶活的测定 | 第29页 |
| 2.9.4 N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线的制作 | 第29-30页 |
| 2.10 YM9-2 菌株的几丁质酶基因的克隆和测序 | 第30页 |
| 2.11 YM9-2 菌株抑制真菌活性的研究 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-41页 |
| 3.1 Bt晶体形态观察 | 第31页 |
| 3.2 Bt几丁质酶基因的克隆表达与酶活性测定 | 第31-35页 |
| 3.2.1 几丁质酶基因chi A73的克隆和序列分析 | 第31-32页 |
| 3.2.2 几丁质酶Chi A73蛋白结构分析 | 第32-33页 |
| 3.2.3 chi A73在大肠杆菌中的表达 | 第33页 |
| 3.2.4 原菌发酵液与表达蛋白Chi A73的活性检测 | 第33-34页 |
| 3.2.5 p H值和温度对几丁质酶Chi A73活性的影响 | 第34-35页 |
| 3.3 产几丁质酶菌株筛选结果 | 第35页 |
| 3.4 生长形态和培养特征 | 第35-36页 |
| 3.4.1 YM9-2 菌落培养形态特征 | 第35-36页 |
| 3.4.2 YM9-2 菌株生长特征 | 第36页 |
| 3.5 YM9-2 菌株的 16Sr RNA序列分析 | 第36-37页 |
| 3.6 比色法测定产酶菌的总酶活力 | 第37-38页 |
| 3.6.1 N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线 | 第37页 |
| 3.6.2 酶活体系的测定 | 第37页 |
| 3.6.3 YM9-2 菌株生长曲线测定 | 第37-38页 |
| 3.6.4 YM9-2 菌株产酶曲线测定 | 第38页 |
| 3.7 YM9-2 菌株的几丁质酶基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3.8 蛋白结构分析 | 第39-40页 |
| 3.9 YM9-2 菌株抑制病原真菌生长的研究 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 4.1 几丁质酶酶活力测定方法 | 第41页 |
| 4.2 几丁质酶Chi A73的结构与功能 | 第41页 |
| 4.3 几丁质酶最适反应p H值 | 第41-42页 |
| 4.4 几丁质酶产生菌的分离及其基因克隆 | 第42页 |
| 4.5 几丁质酶的抑制病原真菌的作用 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第51页 |
