吩噻嗪类药物广谱单克隆抗体及阿莫西林单链抗体的制备
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 吩噻嗪类药物概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 理化性质 | 第11页 |
| 1.1.2 药理作用 | 第11-12页 |
| 1.1.3 毒理作用 | 第12页 |
| 1.1.4 药物残留及其危害 | 第12页 |
| 1.2 青霉素类药物概述 | 第12-15页 |
| 1.2.1 理化性质 | 第13-14页 |
| 1.2.2 药理作用 | 第14页 |
| 1.2.3 毒理作用 | 第14页 |
| 1.2.4 药物残留及其危害 | 第14-15页 |
| 1.3 吩噻嗪类和青霉素类药物的残留检测方法 | 第15-17页 |
| 1.3.1 高效液相色谱法(HPLC) | 第15页 |
| 1.3.2 气相色谱-质谱联用法(GC/MC) | 第15-16页 |
| 1.3.3 液相色谱-质谱联用法(LC/MC) | 第16页 |
| 1.3.4 酶联免疫吸附法(ELISA) | 第16-17页 |
| 1.4 单克隆抗体的制备 | 第17页 |
| 1.4.1 单克隆抗体的概念及其制备原理 | 第17页 |
| 1.4.2 单克隆抗体的应用 | 第17页 |
| 1.5 新型抗体的概述 | 第17-21页 |
| 1.5.1 基因工程抗体 | 第18-19页 |
| 1.5.2 核酸适配体 | 第19页 |
| 1.5.3 受体 | 第19-20页 |
| 1.5.4 单链抗体 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 吩噻嗪类药物广谱单克隆抗体的制备 | 第22-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 仪器与设备 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂与药品 | 第22-23页 |
| 2.1.3 所用溶液 | 第23-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 半抗原的合成 | 第25页 |
| 2.2.2 完全抗原的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.3 抗体的制备 | 第26-28页 |
| 2.2.4 杂交瘤细胞的制备 | 第28-30页 |
| 2.2.5 小鼠腹水的制备 | 第30页 |
| 2.2.6 单克隆抗体的纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.7 单克隆抗体的特异性和灵敏度 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.3.1 半抗原的鉴定 | 第31页 |
| 2.3.2 完全抗原的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 血清效价 | 第32-33页 |
| 2.3.4 血清特异性 | 第33页 |
| 2.3.5 杂交瘤细胞株的建立 | 第33-34页 |
| 2.3.6 单克隆抗体的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.7 单克隆抗体的特异性和灵敏度 | 第35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-38页 |
| 2.4.1 半抗原的合成 | 第35-36页 |
| 2.4.2 完全抗原的合成 | 第36页 |
| 2.4.3 抗体的纯化 | 第36-37页 |
| 2.4.4 单克隆抗体的特异性和灵敏度 | 第37-38页 |
| 3 阿莫西林单链抗体的制备 | 第38-52页 |
| 3.1 试验材料 | 第38-41页 |
| 3.1.1 仪器与设备 | 第38页 |
| 3.1.2 试剂与药品 | 第38-40页 |
| 3.1.3 所用溶液 | 第40页 |
| 3.1.4 引物 | 第40-41页 |
| 3.2 试验方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 杂交瘤细胞的复苏 | 第41页 |
| 3.2.2 总RNA的提取及cDNA的合成 | 第41页 |
| 3.2.3 VH和VL的扩增及纯化 | 第41-42页 |
| 3.2.4 ScFv基因的组装及纯化 | 第42-43页 |
| 3.2.5 ScFv基因克隆载体的构建 | 第43页 |
| 3.2.6 原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.7 单链抗体的原核表达 | 第44-45页 |
| 3.2.8 单链抗体的特异性检测 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-49页 |
| 3.3.1 总RNA的提取鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 VH和VL的PCR产物鉴定 | 第46页 |
| 3.3.3 ScFv基因鉴定 | 第46页 |
| 3.3.4 重组质粒的双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.5 ScFv基因的测序结果 | 第47-48页 |
| 3.3.6 单链抗体的SDS-PAGE检测 | 第48-49页 |
| 3.3.7 单链抗体的特异性检测 | 第49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-52页 |
| 3.4.1 单链抗体的制备技术 | 第49-50页 |
| 3.4.2 原核表达载体的选择 | 第50页 |
| 3.4.3 表达条件的优化及表达量 | 第50-52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 4.1 成功制备了针对吩噻嗪类药物的单克隆抗体 | 第52页 |
| 4.2 成功制备了针对阿莫西林的单链抗体 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 在读期间发表的学术论文情况 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
