| 摘要 | 第16-19页 |
| Abstract | 第19-23页 |
| 本文缩略词 | 第24-26页 |
| 第一章 绪论 | 第26-54页 |
| 1. 多糖的免疫调节作用 | 第27-34页 |
| 1.1 多糖对免疫器官的作用 | 第27-28页 |
| 1.2 多糖对免疫细胞的作用 | 第28-30页 |
| 1.2.1 多糖对巨噬细胞的作用 | 第28-29页 |
| 1.2.2 多糖对淋巴细胞的作用 | 第29页 |
| 1.2.3 多糖对树突状细胞的作用 | 第29-30页 |
| 1.3 多糖受体及其信号转导 | 第30-34页 |
| 1.3.1 Toll-like受体 | 第31-32页 |
| 1.3.2 补体受体3 | 第32页 |
| 1.3.3 Dectin-1受体 | 第32-33页 |
| 1.3.4 清道夫受体 | 第33页 |
| 1.3.5 甘露糖受体 | 第33-34页 |
| 2. 多糖的直接抗肿瘤作用 | 第34-41页 |
| 2.1 多糖诱导肿瘤细胞发生凋亡 | 第34-38页 |
| 2.2 多糖改变细胞膜的生化特性 | 第38-39页 |
| 2.3 多糖抑制肿瘤转移 | 第39-41页 |
| 2.4 多糖诱导肿瘤细胞周期阻滞 | 第41页 |
| 3. 多糖的构效关系 | 第41-43页 |
| 4. 多糖的研究方法 | 第43-52页 |
| 4.1 多糖提取 | 第44-46页 |
| 4.1.1 溶剂浸提法 | 第44页 |
| 4.1.2 酶法提取 | 第44-45页 |
| 4.1.3 微波和超声波辅助提取 | 第45页 |
| 4.1.4 超高压提取法 | 第45页 |
| 4.1.5 超临界萃取技术 | 第45-46页 |
| 4.2 多糖分离纯化 | 第46-49页 |
| 4.2.1 多糖的分离 | 第46-47页 |
| 4.2.2 多糖的纯化 | 第47-49页 |
| 4.3 多糖结构表征 | 第49-52页 |
| 4.3.1 多糖纯度测定 | 第49页 |
| 4.3.2 多糖分子量和分子尺寸 | 第49-50页 |
| 4.3.3 单糖组成测定 | 第50页 |
| 4.3.4 糖链结构的分析方法 | 第50-52页 |
| 5. 本课题研究目的和意义 | 第52-54页 |
| 第二章 黑根霉菌丝体多糖的制备和结构表征 | 第54-71页 |
| 1. 实验材料与仪器 | 第54-56页 |
| 1.1 菌株 | 第54页 |
| 1.2 实验试剂 | 第54-55页 |
| 1.3 实验仪器 | 第55-56页 |
| 2. 实验方法 | 第56-60页 |
| 2.1 黑根霉的培养 | 第56页 |
| 2.2 黑根霉菌丝体多糖的制备 | 第56-57页 |
| 2.3 理化性质分析 | 第57-58页 |
| 2.3.1 碘-碘化钾反应 | 第57页 |
| 2.3.2 总糖含量的测定 | 第57页 |
| 2.3.3 紫外检测 | 第57-58页 |
| 2.4 高效尺寸排阻色谱联合多角度激光光散射分析 | 第58页 |
| 2.5 单糖组成分析 | 第58-59页 |
| 2.5.1 多糖水解 | 第58页 |
| 2.5.2 柱前衍生条件 | 第58-59页 |
| 2.5.3 色谱条件 | 第59页 |
| 2.5.4 标准曲线的绘制 | 第59页 |
| 2.6 红外光谱分析 | 第59页 |
| 2.7 甲基化分析 | 第59-60页 |
| 2.8 核磁共振波谱分析 | 第60页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第60-70页 |
| 3.1 黑根霉菌丝体多糖的制备 | 第60-62页 |
| 3.2 黑根霉菌丝体多糖的理化性质分析 | 第62页 |
| 3.3 黑根霉菌丝体多糖的单糖组成分析 | 第62-64页 |
| 3.4 黑根霉菌丝体多糖的高效尺寸排阻色谱-多角度激光散射分析 | 第64-65页 |
| 3.5 黑根霉菌丝体多糖的红外光谱测定结果 | 第65-66页 |
| 3.6 黑根霉菌丝体多糖的甲基化分析 | 第66-69页 |
| 3.7 黑根霉菌丝体多糖的核磁共振分析结果 | 第69-70页 |
| 4. 小结 | 第70-71页 |
| 第三章 黑根霉菌丝体多糖RPS的抗肿瘤活性研究 | 第71-88页 |
| 1. 实验材料与仪器 | 第72-73页 |
| 1.1 细胞株 | 第72页 |
| 1.2 实验试剂 | 第72-73页 |
| 1.3 实验仪器 | 第73页 |
| 2. 实验方法 | 第73-79页 |
| 2.1 细胞培养 | 第73-74页 |
| 2.2 细胞增殖活性检测 | 第74页 |
| 2.3 细胞周期检测 | 第74页 |
| 2.4 细胞形态学观察 | 第74-75页 |
| 2.4.1 AO/EB染色 | 第74页 |
| 2.4.2 Hoechst 33258染色 | 第74-75页 |
| 2.5 细胞凋亡检测 | 第75页 |
| 2.6 线粒体膜电位检测 | 第75-76页 |
| 2.7 活性氧检测 | 第76页 |
| 2.8 钙离子浓度检测 | 第76页 |
| 2.9 基因表达检测 | 第76-79页 |
| 2.9.1 总RNA的提取 | 第76-77页 |
| 2.9.2 cDNA的合成 | 第77页 |
| 2.9.3 引物的设计 | 第77-78页 |
| 2.9.4 PCR和实时荧光定量PCR分析 | 第78-79页 |
| 2.10 统计学处理 | 第79页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第79-87页 |
| 3.1 RPS的体外抗肿瘤活性筛选 | 第79-80页 |
| 3.2 RPS诱导BGC-823细胞发生G2/M期周期阻滞 | 第80-81页 |
| 3.3 RPS诱导BGC-823细胞发生线粒体途径凋亡 | 第81-85页 |
| 3.3.1 RPS对BGC-823细胞凋亡的影响 | 第81-83页 |
| 3.3.2 RPS诱导BGC-823细胞线粒体膜电位下降 | 第83-84页 |
| 3.3.3 RPS提高BGC-823细胞内活性氧含量和游离钙离子浓度 | 第84页 |
| 3.3.4 RPS激活BGC-823细胞内caspase-9和caspase-3 | 第84-85页 |
| 3.3.5 RPS对Bcl-2和Bax基因表达的影响 | 第85页 |
| 3.4 RPS诱导BGC-823细胞发生内质网应激 | 第85-87页 |
| 4. 小结 | 第87-88页 |
| 第四章 黑根霉菌丝体多糖RPS-1的免疫调节活性研究 | 第88-111页 |
| 1. 实验材料与仪器 | 第88-91页 |
| 1.1 细胞株 | 第88-89页 |
| 1.2 实验动物 | 第89页 |
| 1.3 实验试剂 | 第89-90页 |
| 1.4 实验仪器 | 第90-91页 |
| 2. 实验方法 | 第91-97页 |
| 2.1 细胞培养 | 第91页 |
| 2.2 细胞增殖活力检测 | 第91页 |
| 2.3 吞噬能力检测 | 第91页 |
| 2.4 一氧化氮测定 | 第91页 |
| 2.5 酶联免疫吸附法测定细胞因子含量 | 第91-92页 |
| 2.6 蛋白提取 | 第92-93页 |
| 2.6.1 细胞总蛋白提取 | 第92页 |
| 2.6.2 细胞核蛋白和细胞浆蛋白提取 | 第92-93页 |
| 2.7 免疫印迹 | 第93页 |
| 2.8 荧光素酶报告基因实验 | 第93-96页 |
| 2.8.1 质粒转化和提取 | 第93-95页 |
| 2.8.2 基因转染 | 第95页 |
| 2.8.3 荧光素酶活性检测 | 第95-96页 |
| 2.9 荷瘤小鼠模型构建 | 第96页 |
| 2.10 肿瘤抑制率、脾指数及胸腺指数的测定 | 第96-97页 |
| 2.11 CD8~+T淋巴细胞分析 | 第97页 |
| 2.12 统计学处理 | 第97页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第97-110页 |
| 3.1 RPS-1对RAW 264.7细胞增殖的影响 | 第97页 |
| 3.2 RPS-1提高RAW 264.7细胞的吞噬活性 | 第97-98页 |
| 3.3 RPS-1促进RAW 264.7细胞分泌一氧化氮和肿瘤坏死因子 | 第98-101页 |
| 3.4 RPS-1激活NF-κB、MAPK和PI3K/Akt通路 | 第101-104页 |
| 3.5 MAPK、PI3K/Akt和NF-κB通路在RPS-1激活巨噬细胞过程中发挥的作用 | 第104-105页 |
| 3.6 MAPK和PI3K/Akt通路的相互作用 | 第105-106页 |
| 3.7 RPS-1对荷瘤小鼠肿瘤生长、免疫器官指数和体重的影响 | 第106-109页 |
| 3.8 RPS-1对荷瘤小鼠血清中细胞因子含量的影响 | 第109页 |
| 3.9 RPS-1对荷瘤小鼠脾脏中CD8~+T淋巴细胞比例的影响 | 第109-110页 |
| 4. 小结 | 第110-111页 |
| 第五章 讨论 | 第111-116页 |
| 参考文献 | 第116-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第132-133页 |
| 附件 | 第133-150页 |
| 附表 | 第150页 |
