| 附件 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-25页 |
| 1.1 动脉粥样硬化疾病模型猪及小型猪近交系 | 第14-15页 |
| 1.2 PCSK9基因的发现与蛋白质分子特性 | 第15页 |
| 1.3 PCSK9基因的生物学功能 | 第15-19页 |
| 1.4 PCSK9基因突变体及其与人类疾病的关系 | 第19-20页 |
| 1.5 PCSK9基因表达的调控 | 第20-21页 |
| 1.6 PCSK9基因为靶点的药物研发 | 第21-23页 |
| 1.7 猪体细胞核移植效率 | 第23-24页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 PCSK9过表达对HEPG2细胞生物学功能的影响 | 第25-50页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.1.1 仪器、试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.2 SDS-PAGE、蛋白转印、Western-Blot试剂配制 | 第27-28页 |
| 2.1.3 PCSK9过表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.1.4 稳定表达PCSK9的HepG2细胞的筛选 | 第29-30页 |
| 2.1.5 HepG2胆固醇流出的流式检测 | 第30页 |
| 2.1.6 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)细胞增殖检测 | 第30页 |
| 2.1.7 EdU细胞增殖检测 | 第30-31页 |
| 2.1.8 细胞划痕愈合实验 | 第31页 |
| 2.1.9 细胞体外Transwell检测 | 第31-32页 |
| 2.1.10 小G蛋白RhoA、Rac1、CDC42-GTP活性检测 | 第32-33页 |
| 2.1.11 细胞中胞浆、胞核蛋白的提取 | 第33页 |
| 2.1.12 Western-blot | 第33-34页 |
| 2.1.13 ELISA | 第34页 |
| 2.1.14 细胞流式检测 | 第34页 |
| 2.1.15 数据分析 | 第34-35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-48页 |
| 2.2.1 人PCSK9基因野生型、D374Y突变体过表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.2 人PCSK9基因过表达载体在HepG2细胞中的正常转录、翻译、分泌 | 第37-38页 |
| 2.2.3 人PCSK9蛋白在HepG2细胞中的过表达能够导致LDLR水平的下降 | 第38-39页 |
| 2.2.4 人PCSK9基因的过表达显著抑制HepG2细胞胆固醇的流出 | 第39-43页 |
| 2.2.5 人PCSK9基因的过表达不影响HepG2细胞的增殖 | 第43-45页 |
| 2.2.6 人PCSK9基因的过表达显著抑制HepG2细胞的迁移 | 第45页 |
| 2.2.7 HepG2细胞迁移相关通路检测 | 第45-48页 |
| 2.3 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 人PCSK9 D374Y突变体转基因猪的制备 | 第50-69页 |
| 3.1 材料与方法 | 第50-58页 |
| 3.1.1 猪体细胞克隆相关溶液的配制 | 第50-51页 |
| 3.1.2 猪胎儿成纤维细胞原代分离培养 | 第51-52页 |
| 3.1.3 转基因猪胎儿成纤维细胞的筛选 | 第52-53页 |
| 3.1.4 猪体细胞克隆 | 第53-54页 |
| 3.1.5 仔猪护理 | 第54页 |
| 3.1.6 PCR和定量RT-PCR | 第54-55页 |
| 3.1.7 Southern blot | 第55-57页 |
| 3.1.8 组织学分析 | 第57-58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-65页 |
| 3.2.1 PCSK9转基因细胞G418阳性克隆的筛选 | 第58-59页 |
| 3.2.2 PCSK9转基因克隆猪的制备 | 第59-61页 |
| 3.2.3 PCSK9转基因猪DNA、RNA、蛋白水平的检测 | 第61-62页 |
| 3.2.4 PCSK9转基因猪肝脏、肺脏组织切片的HE染色 | 第62-63页 |
| 3.2.5 PCSK9转基因猪肝脏、肺脏中PCSK9、LDLR的组织化学染色 | 第63-65页 |
| 3.3 讨论 | 第65-69页 |
| 3.3.1 PCSK9基因相关的动物模型 | 第65-66页 |
| 3.3.2 转基因猪的检测 | 第66-67页 |
| 3.3.3 提高猪胎儿成纤维细胞PEF转基因药物筛选的效率 | 第67-68页 |
| 3.3.4 影响猪体细胞克隆的因素 | 第68-69页 |
| 第四章 全文结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
