| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 猪伪狂犬病 | 第12-13页 |
| 1.2 伪狂犬病病毒 | 第13-15页 |
| 1.2.1 伪狂犬病病毒的生物学特性 | 第13页 |
| 1.2.2 伪狂犬病毒基因组的结构和功能 | 第13-15页 |
| 1.3 细菌人工染色体技术 | 第15-18页 |
| 1.3.1 细菌人工染色体简介与发展 | 第15页 |
| 1.3.2 细菌人工染色体在疱疹病毒研究中的应用 | 第15-16页 |
| 1.3.3 细菌人工染色体修饰技术 | 第16-18页 |
| 1.4 伪狂犬病疫苗研究进展 | 第18页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9技术研究 | 第18-20页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 PRV细菌人工染色体的构建 | 第21-42页 |
| 2.1 材料和方法 | 第21-29页 |
| 2.1.1 细胞、菌株、载体和毒株 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂和相关仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.3 pBAC-HLJ862转移载体同源臂扩增及酶切 | 第21-24页 |
| 2.1.4 pBAC-loxp与CMV-GFP以及上下游同源臂的克隆连接 | 第24页 |
| 2.1.5 提取质粒pBAC-GFP62以及Swa I酶切从而线性化 | 第24页 |
| 2.1.6 共转染 | 第24-25页 |
| 2.1.7 CRISPR/Cas9提高重组效率比较 | 第25页 |
| 2.1.8 重组病毒的纯化 | 第25-26页 |
| 2.1.9 提取重组病毒环化基因组 | 第26页 |
| 2.1.10 DH10B感受态的制备及电转化 | 第26-27页 |
| 2.1.11 pBAC-HLJ8和pBAC-Bartha-K61的筛选及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.1.12 重组病毒的拯救 | 第28页 |
| 2.1.13 重组病毒的电镜观察 | 第28页 |
| 2.1.14 PRV HLJ8与resBAC-HLJ8的复制动力学比较 | 第28-29页 |
| 2.1.15 统计学分析 | 第29页 |
| 2.2 结果 | 第29-39页 |
| 2.2.1 重组病毒构建示意图 | 第29-30页 |
| 2.2.2 中间转移载体pBAC-GFP62的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.3 转染后GFP表达 | 第31页 |
| 2.2.4 CRISPR/Cas9切割提高重组效率验证 | 第31-35页 |
| 2.2.5 蚀斑纯化获得重组病毒及鉴定 | 第35页 |
| 2.2.6 pBAC-HLJ8与pBAC-Bartha-K61的PCR初步鉴定 | 第35-37页 |
| 2.2.7 pBAC-HLJ8与pBAC-Bartha-K61转染Vero细胞拯救病毒 | 第37页 |
| 2.2.8 pBAC-HLJ8 BamH I酶切后脉冲场电泳鉴定 | 第37页 |
| 2.2.9 拯救病毒粒子电镜观察 | 第37-39页 |
| 2.2.10 PRV HLJ8与resBAC-HLJ8复制动力学曲线测定 | 第39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 全文结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 致谢 | 第49-51页 |
| 作者简历 | 第51页 |
